显微镜知识库

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徕卡显微系统的知识库提供有关显微镜学科的科学研究和教学材料。内容旨在对显微镜初学者、有经验的显微镜操作实践者和使用显微镜的科学家在他们的日常工作和实验有所帮助。这里有探索交互式教程和应用笔记，你可以找到你需要的显微镜的基础知识以及前沿技术——快来加入徕卡显微知识社区，分享您的专业知识！
Snapshot from a time lapse of a calcium imaging experiment using the ratiometric calcium indicator Fura-2.

比例成像

细胞的许多基本功能在很大程度上依赖于离子（例如钙、镁）、电压势和细胞质与周围细胞外空间之间的 pH 值的微妙但动态的平衡。这些平衡的变化会显著改变细胞的行为和功能。因此，实时测量细胞内离子、电压和 pH…
Ribbon diagram of a donor (D) and acceptor (A) molecule which participate in FRET (Förster resonance energy transfer).

荧光寿命成像与荧光共振能量转移

荧光寿命是荧光团在发射荧光光子返回基态之前保持其激发态的平均时间长度。这取决于荧光团的分子组成和纳米环境。 FLIM将寿命测量与成像相结合：对每个图像像素以测得的荧光寿命进行颜色编码，产生额外的图像反差。因此，FLIM可以提供关于荧光分子空间分布的信息和有关其生化状态或纳米环境的信息。…
Example of calibrating a microscope at a higher magnification value using a stage micrometer.

显微镜测量校准：为什么要这样做？

显微镜校准可确保检测、质量控制 (QC)、故障分析和研发 (R&D) 所需的测量准确一致。本文介绍了校准步骤。使用参照物进行校准可使结果具有可重复性，并有助于确保与准则和标准一致。为了获得准确一致的结果，建议校准显微镜并定期检查。如有需要，可向校准专家寻求支持。
Electron microscope (EM) image of a cross section of C. elegans (roundworm). Courtesy of T. Müller-Reichert, MPI-CBG, Dresden, Germany and K. McDonald, University of California, Berkeley, USA.

高压冷冻简介

水是细胞最主要的组成部分，因此对于维持细胞超微结构至关重要。目前，冷冻固定是固定细胞成分，而不导致其显著结构变化的唯一途径。现阶段有两种常见的方法：投入冷冻与高压冷冻固定。
Area of a printed circuit board (PCB) which was imaged with extended depth of field (EDOF) using digital microscopy.

如何形成清晰的图像

在显微镜检查中，景深常被看做经验参数。在实际操作中，会根据数值孔径、分辨率和放大率之间的相关性确定该参数。为了获得最佳视觉效果，现代显微镜的调节设备在景深和分辨率之间实现了最佳平衡，这两个参数在理论上呈负相关。
These images show the microstructure of a hard metal with 10% cobalt which is used for heavy-duty tools. The large increase in magnification of the right image (compared to the left) has a risk of being outside the useful range or, in other words, empty magnification.

当心“无效”放大率

在一个最简化的情况，光学显微镜由一个靠近标本的透镜（物镜）和一个靠近眼睛的透镜（目镜）组成。显微镜放大率是两个显微镜透镜系数的乘积。比如，40倍物镜和10倍目镜可以得到400倍放大率。
Multicolor TauSTED Xtend 775 for Cell Biology applications that require nanoscopy resolution for multiple cellular components. Cells showing vimentin fibrils (AF 594), actin network (ATTO 647N), and nuclear pore basket (CF 680R). Sample courtesy of Brigitte Bergner, Mariano Gonzales Pisfil, Steffen Dietzel, Core Facility Bioimaging, Biomedical Center, Ludwig-Maximilians-University, Munich, Germany.

STED样品制备指南

这份指南旨在帮助用户优化受激发射损耗（STED）纳米成像的样品制备，特别是在使用徕卡微系统的STED显微镜时。它提供了单色STED成像用荧光标记的概述，并对其性能进行了评级。
一份基于高光谱SRS（受激拉曼散射）数据集的8色光谱解混结果，展示了未经处理的新鲜苹果切片的生化结构差异。

如何为受激拉曼散射（SRS）成像制备样品

请参阅以下关于受激拉曼散射（SRS）的样本制备、图像采集、数据分析和流程开发的指南。受激拉曼散射光谱成像技术也被称为SRS显微技术。
Image of a Siemens star, where the diameter of the 1st black line circle is 10 mm and the 2nd is 20 mm, taken via an eyepiece of a M205 A stereo microscope. The rectangles represent the field of view (FOV) of a Leica digital camera when installed with various C-mounts (red 0.32x, blue 0.5x, green 0.63x).

30000:1放大率到底意味着什么？

关于光学显微镜性能的一个重要标准是放大率。本报告将为数字显微镜用户提供有用的指南，以确定放大率值的有用范围。
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