显微镜知识库

徕卡显微系统的知识库提供有关显微镜学科的科学研究和教学材料。内容旨在对显微镜初学者、有经验的显微镜操作实践者和使用显微镜的科学家在他们的日常工作和实验有所帮助。这里有探索交互式教程和应用笔记，你可以找到你需要的显微镜的基础知识以及前沿技术——快来加入徕卡显微知识社区，分享您的专业知识！

小鼠成纤维细胞，F-肌动蛋白用 FITC 标记（绿色），微管蛋白用 Cy5 标记（红色），细胞核用 DAPI 标记（蓝色）。图片由德国海德堡马克斯-普朗克医学研究所 Günter Giese 博士提供。

荧光染料应用和特性概述

本文将介绍常用的荧光染料并概述其特性。荧光显微镜借助荧光染料、荧光蛋白或使用抗体的免疫荧光染色来研究特定的细胞成分。由于荧光剂种类繁多，荧光显微镜可用于检查蛋白质、核酸、聚糖、细胞器和其他细胞结构。

Zebrafish heart, DAPI (nuclei, blue), Tropomyosin (cardiomyocytes, red) and GFP (primordial cardiac layer, green). Courtesy of Anna Jazwinska, University of Fribourg, Switzerland.

显微镜中的荧光

荧光显微技术是一种特殊的光学显微镜技术。它利用的是荧光色素在一定波长的光激发下发光的能力。通过抗体染色或荧光蛋白标记，可以用这种荧光色素标记感兴趣的蛋白质。这样就可以确定单分子物种的分布、数量及其在细胞内的定位。此外，还可以进行共定位和相互作用研究，使用可逆结合染料（如 Ca2+ 和 fura-2）观察离子浓度，以及观察细胞的内吞和外吞过程。如今，利用荧光显微镜甚至可以对亚分辨率颗粒进行成像。

Some 2D measurements, e.g., lengths and areas, made on a PCB sample with a Leica measurement microscope using the Enersight software.

如何选择合适的测量显微镜

使用测量显微镜，用户可以测量样品特征的二维和三维尺寸，这对检测、质量控制、故障分析和研发&D 至关重要。然而，选择合适的显微镜需要评估应用需求以及显微镜的性能、易用性和灵活性。如今，测量通常以数字方式进行，即使用带有摄像头和软件的显微镜，图像显示在显示器上，而不是通过目镜网线，从而提高了精度和可重复性。使用合适的测量显微镜可靠、快速地分析样品。

Example of calibrating a microscope at a higher magnification value using a stage micrometer.

显微镜测量校准：为什么要这样做？

显微镜校准可确保检测、质量控制 (QC)、故障分析和研发 (R&D) 所需的测量准确一致。本文介绍了校准步骤。使用参照物进行校准可使结果具有可重复性，并有助于确保与准则和标准一致。为了获得准确一致的结果，建议校准显微镜并定期检查。如有需要，可向校准专家寻求支持。

Shown is the DMi8 inverted microscope which is used for life-science research.

选择研究用显微镜时应考虑的因素

光学显微镜通常是生命科学研究实验室的核心设备之一。它可用于各种应用，揭示许多科学问题。因此，显微镜的配置和功能对其应用范围至关重要，从明视野显微镜到荧光显微镜，再到活细胞成像。本文简要概述了显微镜的相关功能，并总结了在选择研究用显微镜时应考虑的关键问题。

The infinite light path of a Leica microscope can be accessed between the light source and objective lens. This approach utilizing mirrors and beam splitters in the illumination path allows users to perform multiple applications with the microscope.

无限远光学系统 - 从 "无限远光学 "到无限远端口

"无限远光学 "是指显微镜的物镜和管状透镜之间的光路具有平行光线的概念 [1]。在这个 "无限远空间 "中放置平面光学元件不会影响图像的形成，这对于科学应用中常用的 DIC 或荧光等对比方法至关重要。需要在无限远光路中添加光源或激光设备等仪器。本文介绍了满足这一需求的不同方法。

使用交叉偏振镜在 Leica 显微镜下拍摄的马尿酸球状晶体，显示所谓的马耳他十字。

偏振光显微镜指南

偏振光显微镜（POL）可增强双折射材料的对比度，在地质学、生物学和材料科学中用于研究矿物、晶体、纤维和植物细胞壁。

Area of a printed circuit board (PCB) which was imaged with extended depth of field (EDOF) using digital microscopy.

如何形成清晰的图像

在显微镜检查中，景深常被看做经验参数。在实际操作中，会根据数值孔径、分辨率和放大率之间的相关性确定该参数。为了获得最佳视觉效果，现代显微镜的调节设备在景深和分辨率之间实现了最佳平衡，这两个参数在理论上呈负相关。

These images show the microstructure of a hard metal with 10% cobalt which is used for heavy-duty tools. The large increase in magnification of the right image (compared to the left) has a risk of being outside the useful range or, in other words, empty magnification.

当心“无效”放大率

在一个最简化的情况，光学显微镜由一个靠近标本的透镜（物镜）和一个靠近眼睛的透镜（目镜）组成。显微镜放大率是两个显微镜透镜系数的乘积。比如，40倍物镜和10倍目镜可以得到400倍放大率。

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