显微镜知识库

徕卡显微系统的知识库提供有关显微镜学科的科学研究和教学材料。内容旨在对显微镜初学者、有经验的显微镜操作实践者和使用显微镜的科学家在他们的日常工作和实验有所帮助。这里有探索交互式教程和应用笔记，你可以找到你需要的显微镜的基础知识以及前沿技术——快来加入徕卡显微知识社区，分享您的专业知识！

Researchers Insights: Microscopy in Cancer Research

Discover how imaging techniques are driving cancer research forward. In this issue, we present comprehensive multimodal studies using microscopy, as well as new directions in intraoperative cancer…

Zebrafish heart, DAPI (nuclei, blue), Tropomyosin (cardiomyocytes, red) and GFP (primordial cardiac layer, green). Courtesy of Anna Jazwinska, University of Fribourg, Switzerland.

显微镜中的荧光

荧光显微技术是一种特殊的光学显微镜技术。它利用的是荧光色素在一定波长的光激发下发光的能力。通过抗体染色或荧光蛋白标记，可以用这种荧光色素标记感兴趣的蛋白质。这样就可以确定单分子物种的分布、数量及其在细胞内的定位。此外，还可以进行共定位和相互作用研究，使用可逆结合染料（如 Ca2+ 和 fura-2）观察离子浓度，以及观察细胞的内吞和外吞过程。如今，利用荧光显微镜甚至可以对亚分辨率颗粒进行成像。

In vivo imaging of a mouse pial and cortical vasculature through a glass window (ROSAmT/mG::Pdgfb-CreERT2 mouse meningeal and cortical visualization following tamoxifen induction and craniotomy). Courtesy: Thomas Mathivet, PhD

神经血管病理学之窗

探索先天性免疫如何在神经血管病变后持续产生有害影响，以及能够对这些事件进行纵向研究的技术发展。

Combining spectrally resolved detection and fluorescence lifetime multiplexing

使用有机荧光团的活细胞荧光寿命多标技术

点播网络研讨会：如何利用荧光寿命多标技术结合光谱分辨检测技术对更多亚细胞目标进行成像。

Donor (D) and acceptor (A) molecule which participate in FRET (Förster resonance energy transfer).

荧光寿命成像与荧光共振能量转移

荧光寿命是荧光团在发射荧光光子返回基态之前保持其激发态的平均时间长度。这取决于荧光团的分子组成和纳米环境。 FLIM将寿命测量与成像相结合：对每个图像像素以测得的荧光寿命进行颜色编码，产生额外的图像反差。因此，FLIM可以提供关于荧光分子空间分布的信息和有关其生化状态或纳米环境的信息。…

通过非拟合且简便的 FRET-FLIM 方法可视化蛋白质 - 蛋白质相互作用

了解活细胞中的分子相互作用对于解读大多数细胞功能背后的分子机制至关重要。研究蛋白质-蛋白质相互作用的金标准是福斯特共振能量转移（FRET）。尽管有几种方法可以在生物样品中证明FRET，但使用荧光寿命成像显微镜（FLIM）可以基于仅供体荧光的行为直接量化FRET。

兔舌横向组织切片。5000 万像素图像（2326 微米 x 1739 微米），由14 × 18个图块拼接而成。荧光寿命提供了额外的对比度，使组织染色中的不同结构得以区分。

在从图像到图像的搜索中切换到快速查看整个样本概览，并即刻识别重要的样本细节。利用这些知识，使用载玻片、培养皿和多孔板的模板自动设置高分辨率图像采集。LAS X Navigator软件像是样本细胞的GPS，总能为用户指明通向高质量数据的清晰路径，这是生命科学平台STELLARIS和THUNDER成像仪上的一款强大的导航工具。LAS X Navigator支持将宽场、立体或共聚焦实验与舞台应用相结合。

基于荧光寿命的成像图库

共聚焦显微镜技术依赖于荧光探针的有效激发以及由荧光过程所发射的光子的高效收集。荧光特性之一是其发射波长（即荧光团的光谱特征）。另一个更为强大但尚未充分探索的特性是荧光寿命（荧光团在激发态的持续时间）。基于荧光寿命的信息增加了共聚焦实验的一个额外维度，能够揭示荧光团微环境的信息，并允许对光谱特性相重叠的物种进行多重分析。

显微镜知识库