使用有机荧光团的活细胞荧光寿命多标技术

我们通过荧光寿命成像显微镜（FLIM）鉴定了18种细胞渗透性合成探针，发现其中有8对组合适合荧光寿命多标。当在不同光谱通道中组合多对探针时，我们可以直接对多达四个亚细胞目标进行光谱解析荧光寿命多标。然而，合成探针只能用于少数目标，而且有时会显示出不合适的寿命特性。

因此，我们在使用合成有机探针的基础上，对合成荧光团采用了第二种标记策略，即自标记蛋白标签。可基因编码的自标记蛋白标签可与感兴趣的蛋白质融合，因此几乎可以标记任何需要的亚细胞靶标。我们设计了自标记蛋白标签 HaloTag7 的变体（即 HaloTag9、HaloTag10 和 HaloTag11），使结合的荧光团显示出不同的荧光寿命。

结合自标记蛋白标签和合成探针，我们可以在四个光谱通道中对多达八个目标进行成像。我们希望这两种方法能促进荧光寿命多标技术在活细胞中的应用。

主要学习内容

• 如何结合光谱解析检测和荧光寿命多标技术，对更多亚细胞靶标成像。
• 可对多达四个亚细胞目标成像的合成探针组合。
• 自标记蛋白标签和合成探针组合，可在四个光谱通道中对多达八个目标成像。