显微镜知识库

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福斯特共振能量转移 (FRET)

荧光描述的是分子或原子在通过光的吸收激发电子系统后，自发发射光子的过程。发射的光子通常能量较低，因此波长较长（斯托克斯位移）。例如，蓝光激发可能导致绿色发射。如果第二个荧光分子能够吸收绿色光子，则该分子的发射再次发生斯托克斯位移，例如变为红色。这种再吸收在浓密样品中会导致测量误差（部分“内滤”效应）。在低浓度样品中，再吸收非常罕见。

显微镜中的荧光

荧光显微技术是一种特殊的光学显微镜技术。它利用的是荧光色素在一定波长的光激发下发光的能力。通过抗体染色或荧光蛋白标记，可以用这种荧光色素标记感兴趣的蛋白质。这样就可以确定单分子物种的分布、数量及其在细胞内的定位。此外，还可以进行共定位和相互作用研究，使用可逆结合染料（如 Ca2+ 和 fura-2）观察离子浓度，以及观察细胞的内吞和外吞过程。如今，利用荧光显微镜甚至可以对亚分辨率颗粒进行成像。