TauContrast 对图像复杂样本的好处

Timo Zimmermann博士： 我经常使用TauContrast功能，它将每个像素的平均寿命信息作为单独的图像通道添加。因为您可以使用脉冲照明作为大多数光谱的标准激发，所以实际上可以免费从探测器中获得寿命信息。这非常重要，因为它以一种极其简单的方式为每个荧光信号提供了另一个维度，实际上是荧光团的一个定义特征。

我主要在一个相当复杂的生物样本中使用TauContrast。在这种情况下，寿命信息除了不太具体的光谱信息外，还增加了很多额外的信息，因此您可以更好地区分结构。换句话说，它在理解复杂形态方面显著帮助了我。我相信，对于那些有大量自然信息的视觉和结构上复杂的样本，不仅仅是您添加的荧光团，它是非常有用的，因为您可以同时看到这些自然结构和标记的结构。

Timo Zimmermann博士： 它让我获得了更多的信息。如果样本中唯一的荧光信号是您通过已建立的荧光标签引入的，并且这些信号在光谱中分布良好，那么寿命信息可能并不是必须的。但是，当您面对更复杂的信息，比如带有背景的样本或结构复杂的样本时，使用寿命信息可以帮助分离不同的信息片段，从而使您更容易理解那些在发射光谱中看起来相似的不同结构。荧光团的特征在于其激发光谱、发射光谱和寿命。获得这三者的信息可以帮助您全面了解样本。考虑到荧光光谱中可能存在的显著重叠，这确实非常有帮助。

Timo Zimmermann博士： 使用TauGating在较厚样本中去除背景非常有用。这是一个可以将信号分隔到不同区域的功能，并通过这些分隔去除背景。对于要求较高的样本，例如厚样本或超大胚胎，获取寿命信息具有很大的潜力，因为这将使您能够专注于重要内容，并帮助您更好地理解这些复杂样本。像类器官和模式生物这样的样本，正在变得越来越重要，因为它们更好地模拟了真实生物学。通过像TauSense这样的新技术，您可以更好地观察这些样本。

拥有荧光寿命信息可以帮助您更好地理解复杂样品。

Timo Zimmermann博士

Timo Zimmermann博士： 这是一个非常完整的系统，因为它还具有其前代产品的独特功能，如共振扫描仪、AOTF（声光可调滤波器）和AOBS（声光分束器），这些功能可以去除所有玻璃滤光片和分束器组件，或利用白光激光实现光谱自由。对于共聚焦实验来说，这些功能仍然非常关键，而STELLARIS在这些功能的基础上进行了改进并增加了新的功能。

如果您正在运营一个核心设施，系统的灵活性是至关重要的，而STELLARIS在设计上很好地反映了这一点。STELLARIS可以满足我们在核心成像设施中对共聚焦显微镜的所有需求，尤其是在检测方面没有限制，您可以自由使用白光激光，并根据需要进一步调整激发光源。如果需要更大的功率，还可以添加固态激光器。而且，正如之前提到的，白光激光是脉冲的，因此您几乎可以免费使用寿命信息，这是一大优势。

所以，这只是一个非常灵活的系统。它从各个角度为共聚焦实验提供了自由：共振扫描仪在需要时提供速度，因为它可以在成像过程中随时切换，还有非常好的通用Power HyD探测器，可以在模拟和光子计数模式之间切换。拥有这两种模式为您提供了许多可能性，您可以轻松地在模式之间切换，并且还可以为每个探测器单独设置它们，从而在动态范围上有更多选择。软件界面ImageCompass的新设计在荧光通道选择方面提供了良好的可访问性。因此，对我来说，STELLARIS在共聚焦成像方面具有全面的适用性。

该采访是在 2021 年 2 月Timo Zimmermann回到海德堡的欧洲分子生物学实验室（EMBL）后进行的。