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人类血细胞实验流程

徕卡 EM CPD300 应用说明 - 生命科学研究

 Human_Blood_Cells_Part.jpg

引言:

物种:人类(智人)

人血液样本的临界点干燥,随后进行铂/钯镀膜和SEM分析

流程:

样品架

样品被插入到 12 mm的盖玻片架中

准备:

在 12 孔细胞培养板中放置直径 12 mm的聚-L-赖氨酸涂层盖玻片。每个孔中加入 1 ml 0.85%的NaCl以覆盖每个盖玻片。

轻轻吸取 50μl 血液到每个玻璃盖玻片上,25°C 下放置 5 min。

在血细胞上方加入 200μl 0.2 M CaCl2以激活血小板,静置 10 min 。

固定和脱水:

轻轻在血细胞上方加入 1ml 4%多聚甲醛和 0.4%戊二醛的 0.2 M 羧酸钠缓冲液,pH 7.2,至少在室温下静置 10min。

蒸馏水 3x10 min.
1%水溶性OsO4, 4°C 16 h
蒸馏水 3x10 min.
梯度乙醇: 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 96%, 100% 1x10 min.
梯度丙酮: 30%, 50%, 100% 1x10 min.

徕卡 EM CPD300 自动程序:

镀膜:

将干燥的样品装在含有碳粘合剂的支架上

铂/钯喷镀:6 nm

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