Image of roundworm C. elegans acquired with a M205 FA fluorescence automated stereo microscope in combination with Rottermann contrast. Areas labelled with mCherry are seen as reddish purple.

线虫研究指南 - 针对线虫的相关工作

利用显微镜推动发育生物学、细胞信号转导、衰老和神经科学与 elegans（线虫）的发展

Image of roundworm C. elegans acquired with a M205 FA fluorescence automated stereo microscope in combination with Rottermann contrast. Areas labelled with mCherry are seen as reddish purple. Roundworm_C_elegans_M205_FA_Rottermann_contrast.jpg

本指南概述了可以高效进行 线虫 研究的显微镜技术。线虫是一种广泛使用的模式生物，与人类有大约 70% 的基因同源性，是研究发育、神经科学、遗传学和衰老的理想生物。它的透明性和易培育性使其成为一个出色的遗传学模型系统。它可以进行高分辨率成像。主要的实验方法包括拣虫、转基因、荧光筛选、成像和记录。

显微镜和线虫研究

显微镜是研究线虫的必备工具。在这些步骤中都会用到它们：

  1. "拣虫"：用金属挑针从琼脂平板上挑出虫子，转移到新的平板上进行培养或实验
  2. 通过向线虫体内显微注射核酸进行转基因（基因改造）
  3. 荧光筛选，鉴定表达转染荧光蛋白的转基因线虫
  4. 在实验过程中对线虫（从胚胎到成虫的所有阶段）进行成像和记录。

这些任务通过体视显微镜、复合显微镜或共聚焦显微镜来完成。

Cells from C. elegans expressing the fluorescent proteins SPD5-GFP indicating a centriole marker (green) and Histon 2B-Cherry indicating nuclei (red). The 2 pairs of centrioles in the interphase cells are marked with white arrows. The image is the maximum projection of a Z-stack after ICC (instant Computational Clearing) and SVCC (small volume Computational Clearing).
Cells from C. elegans expressing the fluorescent proteins SPD5-GFP indicating a centriole marker (green) and Histon 2B-Cherry indicating nuclei (red). The 2 pairs of centrioles in the interphase cells are marked with white arrows. The image is the maximum projection of a Z-stack after ICC (instant Computational Clearing) and SVCC (small volume Computational Clearing).

线虫研究综述文章

Sep 19, 2016
文章

研究秀丽隐杆线虫（C. elegans）

Jan 20, 2021
画廊

Image Gallery: THUNDER Imager

Jun 07, 2021
画廊

发育生物学图片库

Jul 12, 2021
画廊

基于荧光寿命的成像图库

拣虫

要 "挑选 "具有适当表型或转基因的个体秀 丽隐杆 线虫，或将线虫从一个平板移到另一个平板，研究人员需要使用立体显微镜和一个末端带有金属尖端的小工具。

与拣虫有关的挑战有

  • 对比度不够好时，难以识别线虫的关键解剖细节
  • 长时间拣虫会造成用户疲劳
  • 用工具处理线虫时，显微镜物镜下没有足够的空间
  • 视野不够大时，找虫子很麻烦。

不过，徕卡显微镜具有以下优势，可以克服这些挑战：

  • 配备各种对比方法的透射光底座可实现高光学对比度，从而观察到虫体细节
  • 采用人体工程学模块，用户安装舒适，减少劳累和疲劳
  • 物镜下方空间充足，工作距离可达 122 毫米
  • 视野更大，更容易发现线虫。
Life science application showing c. elegans
Many C. elegans roundworms on an agar plate, as could be the case during worm picking.

显微注射转基因

秀丽隐杆 线虫的转基因通常是通过核酸显微注射完成的。显微注射通常使用配有注射装置的倒置复合显微镜进行。

对 线虫 进行显微注射面临着一些挑战：

  • 对比度不足，无法观察到线虫的精细解剖细节，而这正是进行适当靶向定位所必需的。
  • 没有足够的空间使用微型注射器
  • 设置不稳定时振动太大。

为了克服这些挑战，用户可以利用徕卡显微镜提供的优势：

  • 光学对比方法，如 DIC（微分干涉对比）或 IMC（集成调制对比），可清楚地看到注入线虫的位置
  • 抗震装置（防震装置）稳定可靠
  • 能够使用精确的操作器（Narishige 或 Eppendorf）进行微量注射。
Transgenic C. elegans worm expressing GFP (green fluorescent protein). Thunder image courtesy of L. Ma, School of Life Sciences, Central South University, China.
Transgenic C. elegans worm expressing GFP (green fluorescent protein). Thunder image courtesy of L. Ma, School of Life Sciences, Central South University, China.

荧光筛选

要找到转基因成功的秀丽 隐杆线虫 ，需要使用立体显微镜进行荧光筛选。

线虫荧光筛选存在一定的挑战：

  • 荧光信号暗淡，难以观察荧光转基因
  • 老线虫虫和琼脂发出强烈的自发荧光
  • 由于视野较小，难以发现线虫，导致筛查时间延长。

使用徕卡显微镜可以通过以下方式克服这些筛选难题：

  • 采用三光束技术的独立激发通道提高了信噪比，适用于体视显微镜
  • 使用专门设计的反射镜防止自发荧光，反射镜可与 Leica 透射光底座一起使用
  • 徕卡透射光底座提供大视场和多种对比方法。
Thunder image of an adult hermaphroditic C. elegans worm showing the gonads.
Thunder image of an adult hermaphroditic C. elegans worm showing the gonads. The worm was stained with the following fluorophores: DAPI (blue) indicating nuclei, SP56 (green) sperm, RME-2 (red) oocytes, and PGL-1 (magenta) RNA and protein granules. Courtesy of C. Eckmann, Martin Luther University, Halle, Germany.

显微镜中的对比方法

Jun 09, 2011
文章

光学对比方法

Mar 16, 2023
教程

相差和显微镜

Apr 27, 2023
教程

微分干涉对比（DIC）显微镜

Oct 31, 2024
文章

偏振光显微观察

May 31, 2011
教程

集成调制对比度 (IMC)

Jun 08, 2021
指南

暗场显微镜

Jun 16, 2025
案例研究

利用快速高对比度成像改进斑马鱼-胚胎筛查

Nov 02, 2023
文章

落射荧光显微镜和反射对比显微镜

成像和文件

在筛选和鉴定转基因 秀丽隐杆线虫 标本后，高分辨率成像和精确记录对实验数据分析至关重要。要实现这一目标，需要显微镜配备高质量的摄像头或探测器以及兼容的成像软件。

线虫成像和记录方面的主要挑战是

  • 由于光散射的原因，在对线虫更深处的结构成像时会出现焦外模糊的现象
  • 避免光和热对线虫造成伤害
  • 利用基因编码报告器观察活体线虫的暗淡荧光（包括延时成像）。

使用徕卡显微镜可以克服这些挑战。优势如下

  • 利用图像增强功能，将线虫深处的细节可视化
  • 使用高质量的光学元件、适当的照明光源和灵敏的相机/探测器，减少光照射，降低对线虫的伤害
  • 利用宽场显微镜和高灵敏度显微摄像机的良好单噪比，促进实时成像
  • 必要时，使用转盘、共聚焦或光片显微镜获取更高分辨率的三维图像。
Studying the nervous system of C. elegans: Leica confocal microscope images of a roundworm expressing the fluorescent proteins CFP (cyan), GFP (green), YFP (yellow), and DsRed (red).
Studying the nervous system of C. elegans: Leica confocal microscope images of a roundworm expressing the fluorescent proteins CFP (cyan), GFP (green), YFP (yellow), and DsRed (red).

相关文章

想了解更多信息？
请咨询我们的专家。

价格

我需要产品演示、配置或价格信息。

预约演示

我需要现场或远程演示。

服务与支持

我们能为您提供什么帮助？

应用支持

我需要专业帮助/培训来支持我运作机器。

您想获取专人咨询吗？ Show local contacts

Beckman Coulter LinkBeckman Coulter LogoGenedata LinkIDBS LogoIDBS LinkIDBS LogoAbcam Limited LinkAbcam Limited LogoMolecular Devices LinkMolecular Devices LogoPhenomenex LinkPhenomenex LogoSciex LinkSciex LogoAldevron LinkAldevron LogoIDT LinkIDT Logo
Scroll to top