视频教程：高压冷冻不同载具的填充与组装

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高压冷冻（HPF）是一种低温固定方法，主要用于生物样本，也可用于各种非生物材料。这种技术是对多种细胞类型和组织，或有机和无机复合材料的最佳保存方法。通常情况下，高压冷冻样本在经过适当处理后，会使用 光学 或电子显微镜进行进一步分析。为了满足不同的 HPF应用场景，我们提供适用于各种样品的载具和套件系统。成功冷冻样品的一个重要步骤，是在冷冻之前正确快速地处理样品。其中一个方面是不同载具的填充和组装。

用于 Leica EM HPM100 的平面试样系统

  1. 避免将载具装得过满或过少，否则都会导致冷冻效果不佳。
  2. 避免在填充载具时对样品造成机械损伤，否则会导致冷冻质量不佳
  3. 确保样品与载具之间大小合适。
  4. 操作时间越短越好。应尽可能减少对样品的操作。

用于 Leica EM HPM100 的导管系统

导管系统适用于悬浮样品，主要用于 CEMOVIS 应用（ 玻璃化切片低温电子显微镜）。这种方法可以研究完全水合、分子聚集极少甚至没有的样品。因此，在解析原生态分子结构时，这是一种首选方法。在这种特殊应用中，样品在冷冻前与葡聚糖混合，且最终浓度为 20%。

样品冷冻后可以进行修块（用金刚石刀可轻松修整铜载具，不会造成任何损伤），并在低温超薄切片机上进行切片。详见 "高压冷冻简介"。

填充导管时的简要规则

  1. 避免产生气泡，否则会影响冷冻效果
  2. 避免在冷冻前将样本-葡聚糖混合物保存过久，否则会导致干燥伪影，并影响样本的生理状态。

用于 Leica EM HPM100 的 6 毫米蓝宝石系统

  1. 在组装两片蓝宝石时，要避免气泡的产生，否则会影响冷冻效果，并可能导致蓝宝石破碎。
  2. 在冷冻之前，避免将制备好的蓝宝石-样品-蓝宝石组件保存太久，因为这会影响样品的生理状态。
  3. 确保事先标记培养细胞的蓝宝石片（如碳涂层图案），以便在冷冻后和进一步处理过程中进行区分

致谢

感谢美国犹他大学的渡边茂树博士（Dr. Shigeki Watanabe）对视频的贡献。

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