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EM Cryo CLEM 显微镜是我们的冷冻工作流程中的关键要素。 我非常需要它。

海德堡欧洲分子生物学实验室(德国)电子显微镜核心设备团队领导兼负责人 Yannick Schwab 博士

使用 THUNDER 可以更清晰地识别和显示您感兴趣的区域

为了最佳显示细胞结构,THUNDER EM Cryo CLEM成像系统将高分辨率的冷冻物镜与徕卡显微系统的 THUNDER 技术相结合。 从而获得清晰、无焦外模糊的图像。

THUNDER 采用创新的徕卡成像解析技术 (Computational Clearing) 方法,可消除宽场观察时会出现的离焦模糊信号。 THUNDER EM Cryo CLEM 成像系统还包括一个50倍/数值孔径0.9的物镜。 与常用的长工作距离物镜相比, 该透镜专门为玻璃化样本的高分辨率成像而设计。 得益于宽场显微镜的高速度和易用性,您能更好地识别和观察细胞结构的微小细节。

交互式图像: HeLa 细胞放在 Quantifoil R2 / 2 金膜的 G200F1 载网上。
细胞使用 GFP-TGN46(标记反面高尔基网状结构TGN)和 mCherry-Lifeact(标记纤维状肌动蛋白)转染。 细胞核使用 Hoechst 33342 染色。 样本由英国伦敦弗朗西斯·克里克研究所的 Lucy Collinson 提供。

未使用 THUNDER 成像系统的 HeLa 细胞 使用 THUNDER 成像系统的 HeLa 细胞

简单、可重复的工作流程

如果您需要在电子显微镜中快速找到感兴趣的区域,可轻松标记该区域并在样本传送过程中导出坐标。 直观的软件将引导您完成整个工作流程,使您快速有效地获得所需的结果,有助您使用电子显微镜成功进行研究。 为了获得高分辨率、无焦外模糊的成像结果,请使用 THUNDER 进行后期处理。

您获得的优势:

  • 轻松而精确地定位目标、采集数据——软件将引导您逐步完成成像工作流程
  • 轻松成像——只需标记您感兴趣的区域,软件即可自动捕捉并精确进行全景大图拼接
  • 使用 THUNDER 进行后期处理,获得高分辨率、不模糊的图像
  • 快速、可重复获得的结果——您可以保存和调用完整的实验设置
THUNDER EM Cryo CLEM 成像系统
THUNDER EM Cryo CLEM 成像系统

通过冷冻光学显微镜的坐标变换轻松检索

THUNDER EM Cryo CLEM 成像系统集成的软件不仅能够引导您完成整个成像工作流程,而且您只需点击一下即可导出原始图像数据和相关坐标。 您可以立即在您指定的电子显微镜中重新定位细胞靶区,并开始研究样本的超微结构。

如果您选择使用赛默飞世尔科技公司的 MAPS EM,还可以受益于我们共同开发的冷冻电子断层扫描工作流程。 从使用我们公司的 EM GP2 进行玻璃化冷冻,到使用赛默飞世尔科技公司的 Krios™ G3i 冷冻透射电镜进行 3D 图像重建,该工作流程集成了完整的技术。 

交互式图像: 选择和检索坐标。 在电子显微镜载网上呈现并被选择性标记的细胞荧光图像。 利用坐标标记,在 Thermo Scientific Aquilos 上呈现并精准再定位了同一个细胞。

使用 EM Cryo CLEM ,对电子显微镜载网上呈现并选择性标记的细胞拍摄的荧光图像。 利用坐标标记,在 Thermo Scientific Aquilos 上呈现和精确检索定位了同一个细胞。

保持冷冻条件 

为了尽可能获得成功的实验结果,我们采用独特的套筒系统和封闭式冷冻台确保样本保持玻璃状。 在装载和传输乃至长时间图像拍摄过程中,该系统可最大程度降低污染的可能性。

工作原理

使用套筒系统 (1) 可以安全快速地处理样本。 压夹机构可加快样本通量以及将载网装入冷冻台的时间。

传送对接口 (2) 通过保持最佳温度来保护冷冻样本。 

带有同步物镜盖的冷冻台 (3) 将样本保持在稳定的超压下,从而防止样本被空气污染

通过传送梭将载网套筒装入 THUNDER EM Cryo CLEM 成像系统
通过传送梭将载网套筒装入 THUNDER EM Cryo CLEM 成像系统

为您的生物学研究工作选择合适的工作流程

THUNDER EM Cryo CLEM 成像系统是一款灵活的多用途解决方案,可以运用在不同的电子显微镜工作流程中。

请为您的生物学研究问题相关实验选择最佳的工作流程,以便获得所需的答案。 如需详细了解生命科学研究领域的工作流程解决方案,请下载我们的工作流程手册

低温电子断层扫描片段,显示细胞核周围的原生细胞环境。蛋白酶体在两个不同部位(橙色:膜系蛋白酶体,黄色:篮系蛋白酶体,蓝色:游离蛋白酶体)系在核孔复合体(紫色)上。图中还显示了核包膜(灰色)、核糖体(黑/白)和线粒体(红色,带有一排排黄色的 ATP 合成酶)。
低温电子断层扫描片段,显示细胞核周围的原生细胞环境。蛋白酶体在两个不同部位(橙色:膜系蛋白酶体,黄色:篮系蛋白酶体,蓝色:游离蛋白酶体)系在核孔复合体(紫色)上。图中还显示了核包膜(灰色)、核糖体(黑/白)和线粒体(红色,带有一排排黄色的 ATP 合成酶)。

Cryo CLEM工作流程

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Cryo CLEM工作流程

如果您想准备组织样本,请将THUNDER成像仪EM低温冷冻仪作为中间步骤加入到您的低温冷冻仪工作流程中。

它使您能够轻松地确定感兴趣的区域,并在样品中的特定位置制备薄层。

(1) 使用 PRIMO 进行细胞定位 | (2) 高压冷冻(EM ICE) | (3) 冷冻切片(EM UC7 /EM FC7) | (4) 识别感兴趣区域(THUNDER成像仪 EM Cryo CLEM) | (5) 在 TEM 中成像
(1) 使用 PRIMO 进行细胞定位 | (2) 高压冷冻(EM ICE) | (3) 冷冻切片(EM UC7 /EM FC7) | (4) 识别感兴趣区域(THUNDER成像仪 EM Cryo CLEM) | (5) 在 TEM 中成像

冷冻载网上的薄片工作流程(a)

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冷冻载网上的薄片工作流程(a)

为了从分析本地环境中的蛋白质结构中获得可靠的结果,请使用赛默飞世尔的低温FIB SEM完全集成的工作流程。

用THUNDER成像仪EM Cryo CLEM选择最合适的细胞进行分析,并将坐标转移到Thermo Scientific的Aquilos上,你可以立即检索它们。Aquilos克服了厚度的限制,创造了一个薄冰片,然后可以在TEM中检查。

冷冻载网上的薄片工作流程 - 使用赛默飞 Aquilos Cryo-FIB 扫描电镜。(1) 使用 PRIMO 进行细胞定位 | (2) 快速投入玻璃化冷冻 (EM GP2) | (3) 识别感兴趣区域(THUNDER成像仪 EM Cryo CLEM) | (4) 使用 Thermo Fisher Aquilos cryo FIB SEM 进行减薄和镀膜 | (5) 在 TEM 中成像
冷冻载网上的薄片工作流程 - 使用赛默飞 Aquilos Cryo-FIB 扫描电镜。(1) 使用 PRIMO 进行细胞定位 | (2) 快速投入玻璃化冷冻 (EM GP2) | (3) 识别感兴趣区域(THUNDER成像仪 EM Cryo CLEM) | (4) 使用 Thermo Fisher Aquilos cryo FIB SEM 进行减薄和镀膜 | (5) 在 TEM 中成像

冷冻载网上的薄片工作流程(b)

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冷冻载网上的薄片工作流程 (b)

THUNDER成像仪EM Cryo CLEM可以被整合到每个FIB-SEM工作流程中。

我们的产品可以无缝连接,以确保整个过程中样品的安全转移。

冷冻载网上的薄片工作流程 - 适用于除Thermo Fisher Aquilos cryo-FIB SEM之外的所有FIB-SEM供应商:(1) 使用PRIMO进行细胞定位 | (2) 快速投入玻璃化冷冻(EM GP2) | (3) 识别感兴趣区域(THUNDER Imager EM Cryo CLEM) | (4) 真空冷冻转移(EM VCM) | (5) 镀膜导电化(EM ACE600/EM ACE900) | (6) 转移(EM VCT500) | (7) 在FIB中减薄 | (8) 在TEM中进行成像。
冷冻载网上的薄片工作流程 - 适用于除Thermo Fisher Aquilos cryo-FIB SEM之外的所有FIB-SEM供应商:(1) 使用PRIMO进行细胞定位 | (2) 快速投入玻璃化冷冻(EM GP2) | (3) 识别感兴趣区域(THUNDER Imager EM Cryo CLEM) | (4) 真空冷冻转移(EM VCM) | (5) 镀膜导电化(EM ACE600/EM ACE900) | (6) 转移(EM VCT500) | (7) 在FIB中减薄 | (8) 在TEM中进行成像。

使用 Alvéole 的 PRIMO 进行细胞定位

在 EM 网格上使用 Alvéole 的 PRIMO 无掩膜微图案系统可以控制细胞附着位置和展平形状。放心,您将获得定位良好的细胞,其中包含您寻找的目标结构。PRIMO可以作为第一步添加到所有 Cryo CLEM 工作流程中。.

我们与 Thermo Fisher Scientific 紧密合作,开发了完全集成的冷冻电子断层成像工作流程。

THUNDER Imager EM Cryo CLEM 和 Aquilos 冷冻 FIB-SEM 之间实现了无缝通信。它们能够快速检索目标结构,并在系统之间进行安全可靠的样品转移。

在此了解有关 PRIMO 集成和与 Thermo Fisher Scientific 共同开发的工作流程的更多信息.

点击下面的工作流程解决方案,了解如何实现高质量的结果。有关生命科学研究的工作流程解决方案的更多信息,请下载我们的工作流程手册.

(1) 未经微图案处理的EM载网 | (2) PRIMO 控制细胞粘附 | (3) 玻璃化| (4)选择| (5)铣削| (6) 3D 冷冻断层扫描 | (7) 细胞内的蛋白质
(1) 未经微图案处理的EM载网 | (2) PRIMO 控制细胞粘附 | (3) 玻璃化| (4)选择| (5)铣削| (6) 3D 冷冻断层扫描 | (7) 细胞内的蛋白质
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