Christoph Greb , Dr.
Christoph Greb studied cell biology, parasitology and virology at the Philipps University in Marburg. In the course of his diploma thesis and his dissertation at the local Institute for Cytobiology and Cytopathology he examined the vesicular transport of apically destined proteins in polarized epithelial cells utilizing biochemistry as well as TIRF and confocal microscopy. From December 2011 he was writing for the Leica Science Lab as a freelancer. After his engagement for Novartis Vaccines & Diagnostics he started as Scientific Writer for the widefield team of Leica Microsystems in October 2013.
组织中的精密空间蛋白质组学信息
尽管可使用基于成像和质谱的方法进行空间蛋白质组学研究，但是图像与单细胞分辨率蛋白丰度测量值的关联仍然是个巨大的挑战。最近引入的一种方法，深层视觉蛋白质组学（DVP），将细胞表型的人工智能图像分析与自动化的单细胞或单核激光显微切割及超高灵敏度的质谱分析结合在了一起。DVP在保留空间背景的同时，将蛋白丰度与复杂的细胞或亚细胞表型关联在一起。
![[Translate to chinese:] Mouse brain (left) microdissected with a 10x objective (upper right). Inspection of the collection device (lower right).](/fileadmin/_processed_/f/3/csm_Mouse_brain_microdissected_with_10x_objective_5fbd8963bf.jpg "[Translate to chinese:] Mouse brain (left) microdissected with a 10x objective (upper right). Inspection of the collection device (lower right).")
激光微切割（LMD）促进的分子生物学分析
使用激光微切割（LMD）提取生物分子、蛋白质、核酸、脂质和染色体，以及提取和操作细胞和组织，可以深入了解基因和蛋白质的功能。它在神经生物学、免疫学、发育生物学、细胞生物学和法医学等多个领域有广泛应用，例如癌症和疾病研究、基因改造、分子病理学和生物学。LMD 也有助于研究蛋白质功能、分子机制及其在转导途径中的相互作用。
数码显微镜摄像头和图像分析的基础技术术语定义
现今绝大多数显微镜都配置了摄像头。摄像头的特征通常决定了所采集到的图像是否能够揭示出研究人员希望观察到的现象。但深入到摄像头术语时，技术术语十分繁杂。我们汇总整理了最为重要的术语及其简明释意以便提供方向。这些术语按字母顺序排列。
采用徕卡THUNDER-DM6B观察SARS-CoV-2感染宿主细胞及其复制过程
冠状病毒2致重度急性呼吸综合征(SARS-CoV-2)
冠状病毒2致重度急性呼吸综合征(SARS-CoV-2)出现于2019年末，并快速传播全世界。由于其大面积的影响，研究人员对病毒的性质进行了深入的研究以期最终阻止大流行。一个重要的方面是病毒如何在宿主细胞中复制。Ogando及其同事的研究已经揭示了SARS-CoV-2的复制动力学、适应能力和细胞病理学。他们的工具之一是用荧光显微镜观察SARS…
![[Translate to chinese:] Molecular structure of the green fluorescent protein (GFP)](/fileadmin/_processed_/a/c/csm_Fluorescent-Proteins_5a50f9b8af.jpg "[Translate to chinese:] Molecular structure of the green fluorescent protein (GFP)")
荧光蛋白简介
本文概述了荧光蛋白及其光谱特性。随着 20 世纪 50 年代末荧光蛋白的发现，荧光显微技术发生了巨大变化。它始于 O. Shimomura 和来自水母（Aequorea victoria）的绿色荧光蛋白（GFP）[1]。后来出现了数百种 GFP…
什么是膜片钳技术？
离子通道的生理学一直是神经科学家感兴趣的一个重要话题。诞生于1970年代的膜片钳技术开启了电生理学家的新时代。它不仅可以对整个细胞进行高分辨率电流记录，还可以对切下的细胞膜片进行高分辨率电流记录。甚至可以研究单通道事件。然而，由于需要复杂且高灵敏的设备，广泛的生物学背景和高水平的实验技能，电生理学仍然是最具挑战性的实验室方法之一。
![[Translate to chinese:] Neurons imaged with DIC contrast.](/fileadmin/_processed_/3/1/csm_Neurons_imaged_in_DIC_8186d00fbe.jpg "[Translate to chinese:] Neurons imaged with DIC contrast.")
微分干涉对比（DIC）显微镜
本文阐释了在使用显微镜对未染色透明生物样本进行成像时，微分干涉对比法（DIC）为何是明场照明的绝佳方案。
超越反卷积
宽场荧光显微镜通常用于视觉呈现生命科学样本中的结构并获取重要信息。利用荧光蛋白或染料，以高度特异性的方式标记离散的样本部分。为了充分了解某种结构，可能需要以三维方式呈现，但这会对使用显微镜带来某些挑战。
![[Translate to chinese:] Image of MDCK (Madin-Darby canine kidney) cells taken with phase contrast.](/fileadmin/_processed_/6/c/csm_MDCK_cells_in_phase_contrast_5821a63e2b.jpg "[Translate to chinese:] Image of MDCK (Madin-Darby canine kidney) cells taken with phase contrast.")
相差和显微镜
相差是一种光学显微镜技术，用于增加未染色样本的对比度。未染色样本的结构，例如活细胞或其细胞器，在明场照明下观察时可能显得模糊，甚至变得透明。
浸没式物镜
要用显微镜在高倍镜下检查试样标本，有许多因素需要考虑。其中包括分辨率、数字光圈数值孔径（NA）、物镜的工作距离以及物镜前透镜采集图像所用介质的折射率。在这篇文章中，我们将简要地看一下如何使用浸泡介质在盖玻片和物镜前透镜之间利用浸泡介质帮助提高NA和分辨率。此外，我们还将考虑空气和构成载玻片和、盖玻片的空气和玻璃的折射率，以及当光从一种介质传播到另一种介质时，如何使用浸没介质部分地减少失错配。此外，…
显微镜分辨率：概念、因素和计算
在显微镜学中，‘分辨率’一词用于阐述显微镜对细节进行区分的能力。换言之，这是样本内两个能被观察人员或者显微镜摄像头区分的实体点之间的最小距离。显微镜的分辨率本质上与光学元件的数值孔径（NA）以及用于观察样本标本的光波长有关。此外，我们必须考虑Ernst Abbe于1873年首次提出的衍射极限。本文章包含了这些概念的历史介绍并使用相对简单的术语对其进行了解释。
![[Translate to chinese:] Living HeLa cells stained with WGA-488 (yellow), SPY-Actin (cyan), and SiR-Tubulin (magenta). Instant Computational Clearing (ICC) was applied.](/fileadmin/_processed_/b/0/csm_Living_HeLa_cells_Instant_Computational_Clearing_adbd522d11.jpg "[Translate to chinese:] Living HeLa cells stained with WGA-488 (yellow), SPY-Actin (cyan), and SiR-Tubulin (magenta). Instant Computational Clearing (ICC) was applied.")
如何进行动态多色延时成像
本文将举例说明 Mica 进行动态活细胞成像的能力。活细胞成像揭示了各种细胞事件。由于其中许多事件具有快速动态性，显微镜成像系统必须足够快才能记录下每一个细节。这种成像系统的一个主要优势是能够同时捕获多个荧光成像通道，以精确地显示它们的时空相关性。
![[Translate to chinese:] Image of murine-brain tissue showing a region removed with UV laser microdissection.](/fileadmin/_processed_/a/4/csm_Murine-brain_tissue_showing_a_region_removed_with_UV_LMD_926f8e9b22.jpg "[Translate to chinese:] Image of murine-brain tissue showing a region removed with UV laser microdissection.")
不同组织样品制备方法的RNA质量
本文介绍了样品制备过程和紫外激光显微切片（UV LMD）对小鼠脑组织冷冻切片RNA质量的影响。为在提取RNA时获取良好的结果，从高品质组织开始并在处理前后检查RNA质量至关重要。RNA完整性指数（RIN）以1到10的等级标准来显示样品质量。简言之，RIN数值越高，RNA质量越高。这项研究结果表明，可以利用紫外激光显微切片技术，可以从单个组织细胞中获取品质稳定的RNA。
![[Translate to chinese:] 3D Reconstruction of brain slide image_Mica](/fileadmin/_processed_/b/b/csm_Brain_slide_image_3D_Reconstruction_Mica_teaser_dde26fb597.jpg "[Translate to chinese:] 3D Reconstruction of brain slide image_Mica")
3D组织成像：快速预览到高分辨率成像的一键切换
3D组织成像广泛应用于生命科学领域。研究人员利用它来揭示组织组成和完整性的详细信息，或从实验操作中得出结论，或比较健康与不健康的样本。本文介绍了MICA如何帮助研究人员进行3D组织成像。
如何实现快速、稳定的多色活细胞成像
研究人员在活细胞成像技术的帮助下，可以深入了解活细胞甚至完整生物体的动态过程，这包括细胞内和细胞外活动。一些代表性的示例包括蛋白质或脂质转运、免疫细胞迁移，类器官的细胞组织等。活细胞成像要求样本和显微镜系统具备特定的属性。在这篇文章中，我们描述了MICA对这些先决条件的具体调整，并提供了合适的示例。
用MICA完成Caspase 3/7多色检测
Caspases与细胞凋亡过程相关，因此可以利用caspase检测来确定细胞是否正在经历这种程序化的细胞死亡。这些检测可以通过例如流式细胞仪、平板读数仪实现，也可以在显微镜上完成，显微镜可为量化数据补充可见的结构信息。在这篇文章中，我们描述了MICA是如何用于caspase 3/7测定。借助Navigator或像素分类器等工具，MICA让设置、执行和分析caspase…
荧光染料
荧光显微镜的基本原理是借助荧光染料对细胞成分进行高度特异性的可视化观察。这可能是一种与兴趣蛋白质遗传相关的荧光蛋白，如绿色荧光蛋白（GFP）等。如果克隆无法实现，例如在组织学样本上无法实现，则需要使用另一种技术如免疫荧光染色来对兴趣蛋白质进行可视化观察。为此，人们使用抗体来连接不同的荧光染料并将其直接或间接地结合到适当的靶点上。此外，借助荧光染料，荧光显微镜的应用就不再仅局限于蛋白质观察，还能对核…
Factors to Consider When Selecting a Research Microscope
An optical microscope is often one of the central devices in a life-science research lab. It can be used for various applications which shed light on many scientific questions. Thereby the…
Factors to Consider When Selecting a Research Microscope
An optical microscope is often one of the central devices in a life-science research lab. It can be used for various applications which shed light on many scientific questions. Thereby the…
显微镜在病毒学中的应用
引起新型冠状病毒肺炎（Covid-19）的冠状病毒SARS-CoV-2肆虐全球并影响了我们生活的方方面面。对于免疫和治疗方法的搜索研究（即如何抗击该病毒）成为了2020年全人类的第一要务。显微镜在这类研究中起着重要作用。为了了解受体结合、基因组释放、复制、装配和病毒出芽的基本原理以及我们的免疫系统效应，可以使用不同的方法和显微镜。本文概述了为什么显微镜是病毒学和感染生物学的重要工具，并举例说明了不…
![[Translate to chinese:] Image source: Adobe Stock](/fileadmin/_processed_/4/1/csm_AdobeStock_279736060_0c3b8fe9c1.jpeg "[Translate to chinese:] Image source: Adobe Stock")
如何给显微镜消毒
由于目前冠状病毒的流行，人们对安全使用显微镜的去污方法提出了很多疑问。显微镜通常由多个用户共用，因此可能存在微生物污染的风险。此外，微生物本身也可以作为使用显微镜观察的标本。因此，强烈建议经常对显微镜进行消毒。为避免感染，还建议使用一次性手套进行显微镜操作、清洁和去污。如有必要，可使用酒精等对一次性手套进行去污处理，或应经常更换手套，以最大限度地降低污染风险。
![[Translate to chinese:] Mammalian cell culure. Phase contrast and fluorescence image.](/fileadmin/_processed_/3/0/csm_Mammalian_cells_culture_teaser_b84ee811ca.jpg "[Translate to chinese:] Mammalian cell culure. Phase contrast and fluorescence image.")
哺乳动物细胞培养的介绍
哺乳动物细胞培养是生命科学的基本支柱之一。如果不具备在实验室中培养细胞的能力，那么细胞生物学、免疫学、肿瘤研究等学科很难实现快速发展。本文概述了哺乳动物细胞培养系统，可以根据其形态、细胞类型和组织对其进行分类。此外，还介绍了适宜的细胞生长条件以及需要使用何种显微镜来观察细胞。
![[Translate to chinese:]](/fileadmin/_processed_/5/7/csm_convalaria_Widefield-topic_Intro_7c19cc9054.jpg "[Translate to chinese:]")
宽场显微镜简介
‘宽场显微镜’是最基本的显微镜技术之一。其根本上是将整个感兴趣的样本暴露于光源下，由观察者或摄像头（也可连接到计算机显示器）获得图像的技术。
![[Translate to chinese:] Dronpa chromophore](/fileadmin/_processed_/f/d/csm_Dronpa_chromophore_f20b658eed.jpg "[Translate to chinese:] Dronpa chromophore")
光激活、光转化和光控开关荧光蛋白
荧光蛋白（FP）如GFP、YFP或DsRed都是可视化观察活细胞中细胞组分的强大工具。尽管如此，目前仍然会有传统FP达到极限的情形发生。普通FP无法观察特定兴趣蛋白中专有、空间有限的蛋白质群体，因为它们在整个细胞中都有表达。此时，光激活、光转化和光控开关荧光蛋白就登上了舞台。荧光套件中的成员可以从非荧光状态激活，可以改变发射光谱，甚至可以逆转式地“开启和关闭”。借助这些“光学荧光笔”，研究人员可以…
![[Translate to chinese:] Left: Tissue cells marked with an immunolabel (FITC) illuminated with wide-band UV excitation. Note the tissue structure with blue autofluorescence. Right: Same tissue and same immunostaining with FITC label illuminated with epi-illumination using narrow-band blue (490 nm) light. Note the increased image contrast (Ploem, 1967)](/fileadmin/_processed_/c/2/csm_Ploem_Figure_5_Autofluorescence_a_b_fbca553e26.png "[Translate to chinese:] Left: Tissue cells marked with an immunolabel (FITC) illuminated with wide-band UV excitation. Note the tissue structure with blue autofluorescence. Right: Same tissue and same immunostaining with FITC label illuminated with epi-il")
Milestones in Incident Light Fluorescence Microscopy
Since the middle of the last century, fluorescence microscopy developed into a bio scientific tool with one of the biggest impacts on our understanding of life. Watching cells and proteins with the…
Milestones in Incident Light Fluorescence Microscopy
Since the middle of the last century, fluorescence microscopy developed into a bio scientific tool with one of the biggest impacts on our understanding of life. Watching cells and proteins with the…
![[Translate to chinese:] HeLa cells stimulated with LPS. Image has been subjected to deconvolution.](/fileadmin/_processed_/c/0/csm_HeLa_cells_stimulated_with_LPS_deconvolution_cf0b3cf706.jpg "[Translate to chinese:] HeLa cells stimulated with LPS. Image has been subjected to deconvolution.")
显微镜下的慢性炎症
在慢性炎症的过程中，身体的某些部位会反复发炎。许多人类疾病都是如此。在宽场光学显微镜的帮助下，可以对从细胞水平到整个生物体的潜在过程进行检查。本文介绍了几种宽场显微镜应用，如免疫荧光、活细胞成像、组织学和比率分析，以深入了解慢性炎症的发展、相关疾病及其治疗。
Gene Editing with CRISPR/Cas9 - Breakthrough in Genome Engineering
The CRISPR/Cas9 system is one of several different bacterial systems for defense against viral attacks. It consists of two main components. One is a small piece of RNA which binds to the viral target…
无限远光学系统
“无限远光学”这一概念是指在显微镜的物镜和镜筒透镜之间具有平行光线的光束路径。平面光学元件可以进入到这个“无限远空间”中，而不影响成像，这对于利用DIC或荧光等对比度方法至关重要。
现代显微技术需要在无限远光路中添加多种光学仪器，如光源或激光装置。满足这一需求的不同方法已经出现，本文对其进行了描述。
通用 PAINT – 动态超分辨率显微镜
超分辨率显微技术在过去十年中彻底革新了生物学研究。这些技术让我们能够以接近蛋白质大小的分辨率观察细胞内的各个组成部分。然而，对活细胞进行成像仍然是大多数超分辨率技术面临的挑战。在这种背景下，uPAINT（纳米尺度拓扑成像通用点积累）技术受到了广泛关注。这种单分子方法通过动态成像活细胞中持续标记的任意膜生物分子，实现了超高分辨率成像，并能追踪单个分子的运动轨迹。
