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荧光筛选
要找到成功转染荧光蛋白的 果蝇 胚胎或幼虫,就必须对其进行荧光筛选。这项工作使用荧光体视显微镜进行。
对胚胎或幼虫进行荧光筛选有一定的难度:
- 信噪比(SNR)过低导致分辨率不足,从而难以分辨不同表型的细微差别
- 通常情况下,分辨率和景深之间存在折衷关系
- 果蝇及其食物发出的自发荧光
- 长时间使用显微镜时保持舒适。
使用徕卡体视显微镜可以克服这些筛选难题。它可以帮助用户完成以下工作:
- 利用 TripleBeam 技术降低荧光背景噪声,提高信噪比
- 得益于 FusionOptics 技术,可同时获得高分辨率和大景深效果
- 利用计算清除功能,即使是胚胎或幼虫深处的细节也能清晰地显示出来
- 多种对比方法和专门设计的反射镜,配备 Leica 透射光底座,可减少自发荧光
- 使用人体工程学模块,用户可以舒适地工作,减少疲劳和劳累。
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解剖显微镜
考虑采购体视显微镜时的关键因素
成像和文件
在对 果蝇 进行筛选和可能的解剖之后,往往需要对实验进行成像和记录。这一步需要一台带有摄像头和软件的显微镜。
果蝇 实验成像和记录方面的主要挑战是
- 避免蝇类标本因光和热的照射而受损,尤其是在实时成像过程中
- 标本移出视野
- 由于光散射的原因,在对厚结构或标本深处的结构成像时,会出现焦外模糊的情况
- 获取 3D 标本的对焦 2D 图像。
徕卡显微镜可以克服这些挑战。以下是其优势:
- 使用高帧频、高灵敏度的显微镜相机记录快速事件
- 借助计算清除功能,快速查看果蝇标本深处的细节
- 使用宽场显微镜对果蝇标本进行更柔和的光照射
- 利用扩展景深 (EDOF) 成像技术获取整个 Z 叠的同焦图像
- 利用光片和共聚焦显微镜获得更高分辨率的果蝇标本图像。
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常见问题解答
果蝇的生命周期约为 3 周。受精和形成合子后,胚胎发育在卵子中进行。幼虫最终从卵中孵化出来,成长为蛹。然后,蛹发育成成虫。
果蝇被广泛用作遗传学、细胞生物学、生物化学、发育生物学和神经科学领域的模式生物。自 20 世纪初以来,在 2000 年对其基因组进行测序之前,它就一直被用于促进我们对遗传学的了解。
大约 60% 的人类基因和 75% 的人类疾病相关基因在果蝇中都有对应的直系同源物。此外,果蝇的基因组非常简单,只有 4 对染色体(人类有 23 对)。与其他模式生物相比,雌蝇和雄蝇很容易区分。
科学家使用以下方法对果蝇进行基因改造:通过同源重组进行定点突变、CRISPR/Cas9(簇状规则间隔短回文重复序列/CRISPR关联蛋白9)、锌指核酸酶(ZFNs)、转录激活剂样效应核酸酶(TALENs)、引物编辑以及通过PhiC31整合酶进行位点特异性转化。要在果蝇中表达荧光蛋白,通常使用 UAS/GAL4 系统、分离荧光蛋白系统、flybow 系统或增强子陷阱筛选。
利用果蝇进行疾病研究既方便又具有成本效益,因为可以相对快速地对突变蝇进行大规模遗传筛选。
大约 60% 的人类 DNA 与黑腹果蝇的 DNA 相同。人类和苍蝇的共同基因涉及生长和发育过程。大约 75% 的人类致病基因也存在于果蝇体内,因此果蝇是研究疾病的良好模式生物。
果蝇(Drosophila melanogaster)是一种用于遗传研究和其他生物学研究的模式生物。它与人类共享 75% 的致病基因。果蝇的 DNA 代码具有可塑性,而且能够快速繁殖,与人类模型相比,果蝇能够帮助科学家更有效地了解疾病。
黑腹果蝇通常被称为果蝇或醋蝇。黑腹蝇蛆会被腐烂的水果、食物和饮料吸引。它们可以在花园、果园、厨房、垃圾箱等地方找到。