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将动态活细胞数据融入超微结构

活细胞CLEM–徕卡NanoWorkflow

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采用徕卡Nano的工作流程,可以避免过去如海底捞针似的寻找。利用光电关联显微技术,在适当的时间直接鉴别出正确的细胞,并将动态的活细胞数据融入其超微结构中。

我们的EM ICE高压冷冻仪提供了无缝接口和快速传输,可以在几秒钟内冻结这些珍贵的事件。该方法可为时间特定性事件的研究提供EM分辨率。Nano工作流程为您提供了整合式解决方案,从目标定位到结果洞察,帮助提升您的研究。

#捕捉事件瞬间

超微结构中的动力学过程

如今,在分析各种生物学事件时,如细胞内运输、核膜形成或有丝分裂纺锤体组装,您无需猜测其潜在的机制。Nano工作流程提供了成熟的解决方案,它将活细胞光电关联显微技术(CLEM)与高压冷冻的特定时间的物理固定相结合,能够以纳米分辨率研究动态事件。将动态数据、荧光活细胞成像的特异性靶向实体和精确定时的电镜超微结构分析相结合,可以获得丰富的背景数据。

耐心、时间和速度的恰当平衡

许多电子显微镜工作流程是先固定细胞,然后制备样品并进行EM成像。但只有极少数细胞显示出您感兴趣的行为。更复杂的是,这些感兴趣的细胞行为或过程可能是非常短暂的。找到“合适的细胞”通常极为耗时和繁琐,就像“大海捞针”。

活细胞CLEM工作流程使您可以即时捕获相关生物学过程的动态信息,并将这些观察结果融入其超微结构中。采用徕卡Nano工作流程,您可以放心地获得您想要的结果。在电子显微镜上加载样品后,用光学显微镜找到时间和状态均合适的细胞,观察细胞,并迅速可靠地进行检索。由于有专门的SampLink样品室,您可以放松的用光学显微镜寻找感兴趣的细胞,并在适当的时间快速“冻结”它。

倍感放松

SampLink样品室采用了开放腔室设计和连续气体交换,可以保持活细胞健康,使您有足够时间选择感兴趣的区域并成像,直到您找到处于所需状态的细胞。在细胞健康状况下降前你可以轻松且迅速地作出决定。

快速精确

在你鉴别出感兴趣的时间点后的5秒钟内,可完成将SampLink样品室转移到EM ICE,并完成对样品的高压冷冻固定动作,从而用于进一步的下游分析。

动态过程的成像窗口

仅仅5秒的传输时间为您了解活细胞中发生的各种动态过程打开了一扇窗。积累一些经验后,您甚至可以精准把握要在标本中捕获动态过程的确切时间点。无论您是对囊泡运输和分选、丝状伪足运动、内吞作用、细胞迁移、胞质分裂还是对其它各种生物学过程感兴趣,徕卡Nano工作流程都可以为您提供全面的动力学和超微结构信息。

传输前较长的时间窗口可以确保您有充分时间进行样本鉴定和成像。您无需像传统方式那样在几分钟内就必须选择好目标区域,使用我们的产品,您可以更冷静地做出选择,从而提高实验成功率,结果更好,重复性更高。

利用精益化工作流程获得可重复结果


样品制备

保持样品处于最佳状态

利用SampLink样品,可以实现无任何生理干扰地在蓝宝石片细胞培养、运输和成像,,甚至可以在实验室和显微镜成像平台之间传输样品。

  • 利用开放式样品容器和连续气体交换,可实现生理条件下的长时间成像
  • 采用Oxygenie细胞培养系统,控制细胞培养和运输过程中的气体和温度

实时成像

优化的图像分辨率

为了在活细胞成像过程中获得最佳分辨率,THUNDER Imager Nano配备了特殊的蓝宝石校正的浸没式物镜。它可以提供高分辨率,简化了活细胞成像,且无需使用会增加细胞污染风险的浸入式物镜。SampLink样品室可以直接装载到 THUNDER Imager Nano上。

  • 采用THUNDER可实现快速三维活细胞成像,用于更准确的生理学研究,且可实现降噪,以更好地识别目标
  • 它与Oxygenie系统相连接,且通过显微镜进行温度控制,因此样品可保持稳定的生理条件
  • 配备40x / 1.1 NA蓝宝石校正的水浸物镜,优化了图像分辨率

传输

时间是关键

为了尽可能缩短活细胞成像和冷冻固定之间的时间,Nano工作流程配备了直觉化传输操作体系,用户可以在成像后,在同时保持样品生理状态的条件下直接开始冷冻固定步骤。

  • 捕获瞬态事件,传输时间不到5
  • 受益于配有补充耗材的all-in-one配件包
  • 通过滑-放机制,快速装载中板,样品轻松进入EM ICE

高压冷冻

最佳样品固定

利用EM ICE将光学成像后的样品冷冻固定。EM ICE是将经典的高压冷冻与全新的工作流程解决方案相结合的最佳系统。它不仅可以实现Nano工作流程,还可与光刺激实验相结合。

  • 贴壁细胞的玻璃化冷冻
  • 活细胞CLEM提供了高压冷冻光刺激和电刺激的可选升级模块,从而可以结合光刺激实验
  • 利用先进的解决方案获得最佳结果

冷冻替代

下游工作流程

使用EM AFS2EM TRIM2EM UC7EM AC20制备样品,用于后续TEM成像,从我们已建立的冷冻替代下游工作流程中获益。Nano工作流程也适用于SEM断层成像分析。可使用ARTOS 3D在硅片上收集连续超薄切片。

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