显微镜测量校准：为什么要这样做？

显微镜校准可确保检测、质量控制 (QC)、故障分析和研发 (R&D) 所需的测量准确一致。本文介绍了校准步骤。使用参照物进行校准可使结果具有可重复性，并有助于确保与准则和标准一致。为了获得准确一致的结果，建议校准显微镜并定期检查。如有需要，可向校准专家寻求支持。

准确性和可靠性

校准是指通过将仪器（例如光学显微镜）的测量结果与已知的测量标准或参照物进行比较，从而调整和验证仪器测量结果准确性的过程。准确度之所以重要，是因为准确度决定了仪器的测量值与真实值或公认值的接近程度。

正确的校准可确保显微镜在规定的公差范围内提供准确可靠的结果。校准还可以通过减少或尽量减少系统误差来提高精度。由于光学显微镜可用于测量微米级距离和分辨精细细节，因此校准对于获得精确测量结果非常重要，应定期进行。

影响准确可靠结果的因素

显微镜测量中可能出现误差或不一致的因素有很多，例如显微镜使用不当、多个用户频繁使用显微镜进行不同的应用、设置不当、工作区或实验室的环境条件变化等。

为了确保所有显微镜用户的结果长期保持一致和可靠，除了定期校准之外，还应该采取以下措施：

• 尽量减少或消除显微系统在配置或设置方面的错误，这些错误可能是由于多个用户或不同应用的更改造成的
• 保持显微镜使用环境在温度、湿度等方面的稳定
• 纠正使用过程中不必要或意外的变化，如错位、漂移等。
• 在规定范围内按照选定的准则和标准操作显微镜。

履行准则和标准

显微镜校准还有助于确保符合特定应用的国际、地区和组织准则或标准。事实上，某些准则或标准，如 ISO、EN、ASTM、DIN 等，会要求对应用中使用的仪器进行校准认证。

不同类型的光学显微镜

光学显微镜有变焦光学系统，如立体显微镜 [1] ，也有固定光学系统，如复合显微镜 [2] （参见图 1）。此外，还有不带目镜和集成显微镜摄像头的数码显微镜 [3]。传统显微镜有目镜，但通常也可以选择安装数码相机。徕卡显微系统公司提供一系列高品质的体视显微镜、复合显微镜和数码显微镜以及数码显微相机。

使用这些显微镜进行准确可靠的测量都需要校准，每种显微镜都可以使用类似的程序进行校准。如今，测量通常使用数码显微相机，因此校准是通过显示器上显示的相机实时图像完成的。

如上所述，目前使用显微镜进行测量时，通常是在显示器上显示数字图像。校准显微镜之前，请确保相机工作正常。一般来说，校准可以通过软件完成，具体步骤如下：

第 1 步：在显微镜软件中找到并打开校准设置。使用显微镜相机现有的最高像素分辨率，并检查像素是否分档。

第 2 步：如果没有校准文件，则添加一个校准文件，或者创建一个新文件。

第 3 步：在显微镜平台上放置一个适当的测量基准，如平台测微计或带有精确长度刻度的直尺，并在特定放大倍率值下使其清晰聚焦（参见图 2）。

第 4 步：然后，调整实时图像中出现的距离线，使其与参照物上与所需长度相对应的标记相匹配，然后在软件校准设置中标明所测量的长度（参见图 3）。

第 5 步：现在，根据您使用的是变焦显微镜还是固定光学显微镜，将放大倍率改为适当的较高值，并对每个放大倍率重复步骤 4（请参阅图 4）。

为了在更高的放大倍率值下进行精确校准，必须确认距离线的起点和终点位于平台千分尺标记的同一侧或边缘，例如，从左侧（或右侧）边缘到左侧（或右侧）边缘（参见图 4C 和上述视频）。

第 6 步：最后，确认校准，以便软件保存数据。可填写校准报告以备存档（参见图 5）。

重要的一点之后，建议直接在测量基准上进行精确测量，检查校准是否正确。

这些推荐的附件有助于显微镜校准：

• 用于清洁光学器件（如物镜）的无绒纸巾和溶液，以确保参照物的清晰实时图像
• 通过千分尺螺旋定位系统实现基准在平台上的精确水平移动
• 带精细聚焦功能的显微镜平台。

通过徕卡显微系统及其合作伙伴提供的定期校准服务，用户可以根据已知标准长期跟踪显微镜测量的准确性。为了证明显微镜测量结果的准确性、可靠性和随时可用性，需要将测量结果与台式测微计或校准过的测试载玻片进行比较。对某些用户来说，利用这项服务可以节省时间，而且成本效益高。在某些行业和领域，所使用的仪器必须经过认证校准服务。校准频率通常取决于行业或应用，但通常在安装、维修和升级后进行，每年重复一次。

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