主要经验
我们推出徕卡显微系统的SP8 FALCON，这是一款内置超快速FLIM功能的新一代高端共聚焦仪器。该仪器采用新技术，利用内置的光谱HyD探测器，以高达80 MHz（若使用两个探测器则为160 MHz）的频率记录光子到达时间。为实现如此高的计数率，该仪器采用实时10 GHz采样与分析算法，使其在很大程度上免受脉冲堆积效应的影响。FALCON FLIM已完全集成于LAS X软件中，可便捷地采集FLIM时间序列、拼接FLIM全景图像、FLIM XYZ层切数据以及光谱FLIM层析数据等多种成像模式及其组合。
我们对SP8 FALCON的性能进行了严格评估，并将其用于以亚微米级精度高速记录由激动剂诱导的第二信使（如cAMP和Ca²⁺）浓度变化，成像速度可达每秒数帧（512×512像素）。为通过FLIM检测cAMP，我们采用了基于EPAC的新一代专用FLIM传感器，该传感器使用mTurquoise2作为供体，以及两个串联的单体暗态Venus蛋白作为受体。将图像格式缩小至128×128像素后，我们实现了高质量的FLIM时间序列成像，速率达25帧/秒（共振扫描模式下可达83帧/秒），能够检测包括G蛋白激活和钙火花在内的快速信号事件。大量检测到的光子减少了计算寿命值时像素间的差异。最后，我们证明SP8 FALCON适用于固定细胞和活细胞样本的高速FLIM筛选应用。
