酵母的玻璃化切片冷冻电子显微镜（CEMOVIS）观察

徕卡EM HPM100的应用说明 - 生命科学研究

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案例
切片是用徕卡 HPM100和铜管系统高压冷冻仪中冷冻的酵母细胞制备的，将细胞糊与pH 6.5 MES/葡聚糖缓冲液混合，使得最终 MES 浓度为50 mM，葡聚糖浓度为20%。

样品在徕卡 EM UC7/ EM FC7 超薄切片机上，利用微操手在-140℃下进行制备，切片厚度设置为50 nm。将切片附着于Agar lacey grids上。

图1：
左侧为断层重构的切片。
右上为玻璃化酵母细胞的显微照片。
右下为衍射图案。

使用配有4 K Gatan CCD照相机的Tecnai Polara 300KeV（荷兰FEI公司）显微镜对切片成像。切片的放大倍率为23 K，在成像时，采用-6 um的散焦距离拍摄断层图像和-8 um的散焦距离拍摄投影图像，并采用930 mm的相机长度进行衍射。面板A的图像是用IMOD软件包（Kremer等人，1996）中的图像处理软件，对FEI软件采集的断层图像进行重构的中心10张切片的平均图像。

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