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案例 切片是用徕卡 HPM100和铜管系统高压冷冻仪中冷冻的酵母细胞制备的,将细胞糊与pH 6.5 MES/葡聚糖缓冲液混合,使得最终 MES 浓度为50 mM,葡聚糖浓度为20%。
样品在徕卡 EM UC7/ EM FC7 超薄切片机上,利用微操手在-140℃下进行制备,切片厚度设置为50 nm。将切片附着于Agar lacey grids上。
使用配有4 K Gatan CCD照相机的Tecnai Polara 300KeV(荷兰FEI公司)显微镜对切片成像。切片的放大倍率为23 K,在成像时,采用-6 um的散焦距离拍摄断层图像和-8 um的散焦距离拍摄投影图像,并采用930 mm的相机长度进行衍射。面板A的图像是用IMOD软件包(Kremer等人,1996)中的图像处理软件,对FEI软件采集的断层图像进行重构的中心10张切片的平均图像。
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