![[Translate to chinese:] Dividing fission yeast S. pombe stained with two markers against spindle pole bodies (Pcp1-GFP, green) and cytokinesis ring (Rlc1-mCherry; red). Studying_Cell_Division_teaser.jpg](/fileadmin/_processed_/a/7/csm_Studying_Cell_Division_teaser_c91ba55cf9.jpg "[Translate to chinese:] Dividing fission yeast S. pombe stained with two markers against spindle pole bodies (Pcp1-GFP, green) and cytokinesis ring (Rlc1-mCherry; red).")
导言
裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）是一种子囊单细胞真菌，是研究细胞周期、细胞形 态发生、细胞凋亡和衰老等生命过程的重要模型系统 [1]。然而，它的细胞体积小，这给使用传统 显微镜进行活体采集研究带来了巨大挑战，因为小结构会因焦外光线而变得模糊不清。因此，传 统上使用旋转盘显微镜进行这些研究。
研究方法
THUNDER成像仪三维活细胞与即时计算清除（ICC）[2,3]一起用于获得表达环标记Rlc1-mCherry（肌球蛋白II调节轻链）和纺锤体极体标记Pcp1-GFP（包心蛋白/胚乳蛋白）的裂殖酵母活细胞的清晰四维图像。为了克服酵母生长常用培养基（如 YES）典型的高自荧光水平，细胞被安装在琼脂糖涂层垫上，以尽量减少所需的培养基量。
细胞安装协议 (由Javier Encinar del Dedo提供)：
- 0.2克琼脂糖溶于10毫升培养基中，并保持在65°C，以避免凝固。
- 用移液管将2.15µl涂布液滴在42°C预热的载玻片上，然后将第二张载玻片放在上面并保持 15分钟。
- 取下第二张载玻片后，琼脂糖垫就可以移取1.5µl的早期对数期细胞。
- 最后在细胞上铺上盖玻片，再放到显微镜下观察。
- 建议使用水浸镜头来避免光学像差（63x1.2NA），以提高计算清晰度。
使用 THUNDER 三维活细胞成像仪Imager 3D Live Cell 进行成像时，这一简短的方案可跟踪裂殖酵母分裂约 1 小时。 使用了约 16 个平面和一分钟的刻度间隔，以实现亚细胞水平的低光漂白和清晰成像。
![[Translate to chinese:] Microscopy for neuroscience research](/fileadmin/_processed_/9/5/csm_Microscopy_for_neuroscience_research_660cc469dd.jpg "[Translate to chinese:] Microscopy for neuroscience research")
![[Translate to chinese:] Raw widefield and THUNDER image of calcium transients in Drosophila embryos. Courtesy A. Carreira-Rosario, Clandinin laboratory, California, USA.](/fileadmin/_processed_/7/6/csm_Calcium_transients_in_Drosophila_embryos_teaser_51305d161e.jpg "[Translate to chinese:] Raw widefield and THUNDER image of calcium transients in Drosophila embryos. Courtesy A. Carreira-Rosario, Clandinin laboratory, California, USA.")
