使用显微镜观察和判读 H&E染色

如果样本不经染色处理，在显微镜下只能看到组织切片或涂片标本的基本结构，但却无法看到进一步的细节。对于对比度不足的非常薄的切片尤其如此，有时几乎是半透明状态。 

经染色处理后，样本的不同部分显示为不同的颜色和染色强度，从而使组织内的结构可见。最常见的染色组合是苏木精和伊红，简称为H&E染色。

H&E染色前，首先要对组织进行固定、脱水、包埋和切片处理，然后将切片贴到载玻片上。染色前，一般需要使用二甲苯等溶剂移除包埋介质，通常为固体石蜡。然后将切片通过分级醇溶液，降低浓度并置于水中对切片补水。

在下一步中，将切片浸入苏木精溶液中，对细胞核进行染色。染色的强度取决于组织类型、切片厚度、浸泡时间等因素。观察玻片的病理学家的偏好也有影响。用水冲洗后，用蓝色染色液将苏木精的红染色变为蓝色。 

在显微镜下快速观察后，实验室技术员或病理学家便可判断染色是否充分或过度。如果染色不充分，便需要在苏木精中再次浸染。如果染色浓度过强，切片显示背景染色，他们会使用酸性溶液淡化染色，实现切片染色的差异化。这一步骤后，需要再次使用蓝色染液并在自来水下冲洗。 

下一步是伊红染色。伊红是苏木精的复染剂，可差异化地染出红细胞、胶原，并通过粉色展现出平滑肌。分化同样需要根据组织的情况用水洗去过量的伊红。然后将染色后的玻片浸入梯度乙醇中，再浸入二甲苯，对玻片脱水。完成染色和脱水后，使用封片剂来封装切片。

何时检查染色

究竟是在苏木精染色后在显微镜下检查染色和分化，还是在伊红染色后，不同的方案做法也不同。在苏木精染色后检查，无论是再次浸染还是重复分化，都方便立即调整。在伊红染色后检查，可以让实验室技术员或病理学家对全染色玻片有一个更好的了解。

快速检查在实验室工作流中具有重要的作用，可以确保负责诊断的病理学家看到需要的细节信息。 

可见结构

使用明场照明可以观察H&E染色玻片。苏木精将细胞核染为蓝紫色，伊红将细胞质和结缔组织染为浅粉色。借助染色，病理学家可以轻松辨别不同的组织类型，例如肌肉或结缔组织，并发现切片中的畸形或不规则情况。这可以帮助它们识别反应特定的病理的变化，例如感染、慢性炎症或恶性肿瘤。借助可见信息，病理学家可以观察到组织内的结构变化，从而确定疾病的性质和进展。

染色工作流和诊断中使用的显微镜需要可以很好的辨别颜色差异，这对及时、准确的诊断至关重要。检查染色时，通常使用小尺寸的独立正置显微镜，因为实验室工作台一般都比较拥挤。 

诊断使用的显微镜则应配置性能优异的相机，以便拍摄到报告和归档所需的细微的颜色差异。注释功能也有助于创建报告。如果您想了解更多关于适当临床显微镜的信息，可以阅读文章“如何选择临床显微镜”。

• P. Zorzi, C. Müller, Factors for Selecting Clinical Microscopes, Science Lab (2022) Leica Microsystems
• M. Barszczewski, P. Zorzi, P. Laskey, C. Müller, Clinical Microscopy: Considerations on Camera Selection, Science Lab (2022) Leica Microsystems
• C. Alwssandro, How to Benefit from Digital Cytopathology, Science Lab (2022) Leica Microsystems
• P. Zorzi, C. Müller, The Time to Diagnosis is Crucial in Clinical Pathology, Science Lab (2022) Leica Microsystems