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通过 FLIM-FRET 跟踪分子间相互作用

现代科研工作研究分子间如何进行相互作用来完成重要任务。 FLIM-FRET 是探索这种相互作用的金标准。

STELLARIS 8 FALCON 为 FLIM 仪器设定了新的速度标准。

它能在高度动态的细胞事件中完成荧光共振能量转移 (FRET)实验。 您可以在日常实验中采集和分析 FRET 数据。

HeLa 细胞中的笼锁cAMP(环磷酸腺苷),表达 EPAC mT2-dVenus FRET 传感器。 EPAC对紫外线介导的cAMP(环磷酸腺苷)解笼锁的反应(中心区域)。 视频采集速度4帧/秒。 图像大小: 256 x256 像素。 颜色条的尺度(寿命):ns。 由荷兰阿姆斯特丹癌症研究所的Kees Jalink和Bram van den Broek提供。

用凝血酶活化肽刺激后的钙振荡。 单个细胞中的响应被记录为寿命变化。 视频以4 pfs速率拍摄。 图像大小: 256 x 256个像素。 颜色条的尺度(寿命):ns。 由荷兰阿姆斯特丹癌症研究所的Kees Jalink和Bram van den Broek提供。

用生物传感器监测细微而快速的变化

生物传感器是代谢活动、信号传导机制、酸碱度和微环境变化的强大报告元件。

STELLARIS 8 FALCON 可提供荧光寿命中包含的信息,即使在膜电位动力学这类高速事件中也不例外。 这些信息是 STELLARIS 8 系统提供的光谱荧光强度成像和TauSense模式的有力补充。

更可靠、更灵敏的代谢成像

自发荧光 在传统成像中可能是一个问题。 STELLARIS 8 FALCON 可将其转化为有价值的信息。 您现在可以将自发荧光转化为代谢状态、细胞分化和癌症发展的报告元件。

此外,STELLARIS 8 FALCON 能够对活组织进行成像对比,而荧光标记通常是非特异性的,或者会破坏生理条件。

非生理条件下哺乳动物细胞的自发荧光 (酸碱度为 8.5)。 信号与内源性 NAD/NADH 的变化相关。 氧化应激的发展表现为荧光寿命随时间缩短。 原始图像大小: 512 x 512 像素。 颜色条的尺度(寿命):ns。
强度
FLIM

超越光谱选项的荧光基团分离

荧光标记是区分细胞内结构的标准方法。 光谱分离方法非常强大,但有时当发射光谱太接近时,这个方法就会受到限制。

使用 STELLARIS 8 FALCON,您可以充分利用荧光寿命成像的潜力,使用指数拟合、谱图拟合和新的 FLIM 相量分离分析功能来分离多个荧光探针。

交互式图像: 通过寿命对比加以区分的细胞骨架结构。 波形蛋白用Alexa Fluor 555(绿色)免疫标记,微管蛋白用Alexa Fluor 546(蓝色)免疫标记。 荧光基团的光谱非常相似,但它们可通过荧光寿命信息区分。 图像大小: 512 x 512 像素。

使用 STELLARIS 8 FALCON 进行快速寿命成像

STELLARIS 8 FALCON 显微镜克服了FLIM的速度限制,可快速提供寿命数据。

到目前为止,由于FLIM的技术限制,从快速过程的荧光寿命数据中获取功能信息仍有很大难度。 FLIM采集速度比记录共聚焦强度至少慢10倍。

使用 STELLARIS 8 FALCON 快速荧光寿命对比成像, 您能够以适当的速度跟踪细胞的动态过程。 这是因为采用了一种新的时间测量方法,即采用 TCSPC(时间相关单光子计数)技术和智能的数据处理和分析算法。

《自然》网站上的应用指南: SP8 FALCON:荧光寿命成像的新概念,实现视频速率的共聚焦荧光寿命成像

含有Alexa Fluor 555(绿色)溶液中的荧光珠(品红色)单通道图像。 基于荧光寿命的荧光基团分离可以在不同的速度下进行,例如 16帧/秒(上)、27帧/秒(视频速率,中)和 83帧/秒(超快,下)。 通过寿命信息进行染料分离明显比强度信息(灰度)更有优势。 视频展示了寿命组分的逐像素拟合。 帧大小: 512 x 64 像素。 比例尺: 10微米。
轻松采集复杂样本。 高分辨率小鼠胚胎成像,由包含1.9亿像素的722张图像拼接而成。 通过四个特有荧光寿命拟合的FLIM数据,彩色编码。 采集时间: 1小时23分。 分析时间: 1小时

一体化的多模态成像

STELLARIS 8 FALCON 使 FLIM 与其他模态的结合变得十分简单。 一直以来,研究人员都不得不处理复杂的布线和繁琐的文件传输工作。 使用 STELLARIS 8 FALCON,您可以将寿命信息整合到标准的共聚焦工作流程中。

STELLARIS 8 FALCON 可完全整合到 LAS X 采集与分析软件中。 它既可以同时记录4个光谱通道,又可先后记录多达10个通道的荧光寿命成像。 使用 STELLARIS 8 FALCON,您能够在 3D 层扫、延时序列乃至大型拼接成像方式中获得荧光寿命信息。

使用  LAS X NAVIGATOR,您可以将观察区域扩大10,000 倍,更快地识别感兴趣的区域,以全新的方式研究样本。

通过相量简单确定寿命

使用 STELLARIS 8  FALCON 的 FLIM 相量图进行分析,可显示寿命分量的 2D 图。 通过 FLIM 相量分析,您可以跟踪微环境变化,选择多路信号的组分来确定 FRET 效率。

Alexa555-鬼笔环肽和 H2B-mCherry 标记的细胞。 使用 FLIM phasors 执行组分离。 相量图清晰地显示了两种寿命分布。 样本提供方: 德国康斯坦茨大学生物系 Martin Stöckl 博士。 
一键式设计,让您能够专注于科学研究: 由 LAS X 软件控制的 STELLARIS 8 FALCON

只需点击一下即可获得您需要的结果

使用 LAS X 软件,只需点击一下即可获得荧光寿命成像,方法与常规光谱成像相同。

即使您将显微镜当作一种辅助技术,您也可以找到重要的内容,并立即开始成像。

更专业的功能可作为工作流程提供,为您实现方便的自动化工作。

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