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显微镜中的荧光
荧光显微技术是一种特殊的光学显微镜技术。它利用的是荧光色素在一定波长的光激发下发光的能力。通过抗体染色或荧光蛋白标记,可以用这种荧光色素标记感兴趣的蛋白质。这样就可以确定单分子物种的分布、数量及其在细胞内的定位。此外,还可以进行共定位和相互作用研究,使用可逆结合染料(如 Ca2+ 和 fura-2)观察离子浓度,以及观察细胞的内吞和外吞过程。如今,利用荧光显微镜甚至可以对亚分辨率颗粒进行成像。
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如何形成清晰的图像
在显微镜检查中,景深常被看做经验参数。在实际操作中,会根据数值孔径、分辨率和放大率之间的相关性确定该参数。为了获得最佳视觉效果,现代显微镜的调节设备在景深和分辨率之间实现了最佳平衡,这两个参数在理论上呈负相关。
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当心“无效”放大率
在一个最简化的情况,光学显微镜由一个靠近标本的透镜(物镜)和一个靠近眼睛的透镜(目镜)组成。显微镜放大率是两个显微镜透镜系数的乘积。比如,40倍物镜和10倍目镜可以得到400倍放大率。