光电关联显微技术 (CLEM)

想象一下，您可以轻松弥合微米和纳米两种尺度之间的差距，连接功能性和超微结构的信息。对于特定的研究问题，这意味着采用不同的样本制备和显微成像技术来结合多种模式，如活细胞成像、高压冷冻、超薄切片和（冷冻）电子显微成像。CLEM方法有助于弥合这一差距。

徕卡显微系统的CLEM解决方案可确保样本活性、进行质量检查，确保三维目标定位机制精确可靠。用户可以利用这些解决方案的优势，在合适的时间立即识别合适的细胞，获得高分辨率的冷冻共聚焦数据，或将荧光信息与超微结构环境结合起来。

您需要帮助吗？

我们的光电关联显微镜解决方案专家很乐意为您提供建议。

CLEM的用途是什么？

CLEM方法用于以亚纳米分辨率进一步研究样本，不仅能将一个区域内各层的信息结合起来，还能对基体中的感兴趣区域进行特异定位——就像在黑暗中摸索时有了灯塔一样。

例如，可使用冷冻荧光显微镜对标记蛋白轻松检测和定位，然后用冷冻电镜作进一步的蛋白质结构分析（更多信息，请阅读关于Coral Cryo的内容）。再比如说，您想要将动态信息（如细胞间相互作用）与结构信息结合起来，超越光分辨率的限制（更多信息，请阅读关于Coral Life的内容）。

不过，虽然听起来很容易，但要顺利地创建一个成功的（冷冻）CLEM工作流程会面临许多挑战。早在实验设计阶段，用户就应该考虑以下问题：

如何制备样本并使其保持最佳状态？
如何识别和标记感兴趣的目标结构？
如何在仪器之间安全高效地传送样本？
如何以合适的格式提供成像和目标数据，以便执行后续的电镜步骤？

Coral系列可帮助您逐步处理样本，确保CLEM工作流程具有更高的可靠性。

如何将CLEM数据关联起来？

无论是室温还是冷冻CLEM实验，光电关联显微成像对实验的成功都至关重要。必须建立坐标系，而且在不同的成像模式中都能很好地被识别。然后，通过图像拟合（用大视野预览数据）或绝对位置坐标（x、y、z值）叠加成像信息，用于高精度检索高分辨率信息。

Cryo-CLEM是什么？

在Cryo-CLEM（冷冻光电关联显微技术）中，两个成像步骤都在冷冻条件下进行，这意味着需要可靠的冷冻样本制备工作流程。该流程包括可靠的样本玻璃化冷冻、安全的样本转移和稳定的冷冻光学成像。应特别注意冰污染：高湿度环境和含冰污染的液氮容易导致样本处于风险之中。 Coral Cryo可以：1) 安全清洁地处理样本；2) 确保稳定、长期的冷冻光学成像；3) 使用Coral Cryo软件在生物分子的原生环境中对生物分子进行成像和精确定位。

Coral Life工作流程简介

荧光活细胞成像是一种广泛使用的长时间细胞活动成像方式。然而，在有些情况下，通过光学显微镜获取的信息还不足以帮助用户深入了解细胞机制。在这种情况下，自然需要用RT常温电镜以高分辨率生成超微结构图像。

使用徕卡显微系统的Coral Life工作流程，您可以在安全合适的生理环境中通过荧光显微镜对罕见的细胞事件进行跟踪和成像。一旦发生感兴趣的事件，您可最快在短短五秒内将样本玻璃化冷冻，然后在RT常温电镜（如：透射电镜、扫描电镜、FIB聚焦离子束扫描电镜）中进一步分析。

它简化了整个工作流程中的样本转移：从精心维护的细胞培养环境，到荧光成像，再到用高压冷冻方式快速玻璃化冷冻。Coral Life的“活细胞到玻璃化冷冻”工作流程可在发生罕见细胞事件时捕捉事件，使其可用于电镜分析。

Coral Life客户应用示例，维也纳生物中心核心设施(VBCF) Otsuka实验室

生命科学研究

徕卡(Leica)生命科学显微镜凭借先进的创新和专业技术能力，支持观察、测量和分析微结构的成像要求。徕卡显微系统对科学应用领域的高度关注，使徕卡显微系统的用户始终保持领先位置

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病毒学

您的主要研究对象是病毒感染和疾病吗？了解如何使用徕卡显微系统公司的成像和样本制备解决方案深入研究病毒学。

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神经科学研究解决方案

您的工作是更好地了解神经退行性疾病，还是研究神经系统的功能？了解如何使用徕卡显微系统的成像解决方案取得突破。

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癌症研究

癌症是一种复杂的异质性疾病，由于细胞生长失控而引起。一个或一组细胞的基因和表观遗传的变化破坏了正常功能，导致细胞自发、不受控制地生长和增殖。

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阅读关于光电关联显微技术（CLEM）的最新文章

徕卡显微系统的知识门户网站提供有关显微镜学的科学研究资料和教学材料。网站内容专门面向初学者、经验丰富的从业者和科学家，为他们的日常工作和实验提供支持。

简化生物应用的电镜样品制备工作流程

电子显微镜（EM）一直处于超微分辨率生物成像的最前沿，它简化了生物应用的电镜样品制备工作流程。

Micrograph of dinoflagellate cells. Scale bar = 1 µm.

How Marine Microorganism Analysis can be Improved with High-pressure Freezing

In this application example we showcase the use of EM-Sample preparation with high pressure freezing, freeze substiturion and ultramicrotomy for marine biology focusing on ultrastructural analysis of…

[Translate to chinese:] Projection of a confocal z-stack. Sum159 cells, human breast cancer cells kindly provided by Ievgeniia Zagoriy, Mahamid Group, EMBL Heidelberg, Germany. Blue–Hoechst - indicates nuclei, Green–MitoTracker mitochondria, and red–Bodipy - lipid droplets

低温光学显微镜的新成像工具

荧光显微镜图像能够为cryo-FIB加工提供定位支持，其质量决定了所制备薄片的结果。本文描述了LIGHTNING技术是如何显著提高图像质量，以及如何利用该技术基于荧光寿命的信息来辨别样品的不同结构。

[Translate to chinese:] LNG-non-LNGHeLa cells labeled with light blue –Hoechst, Nuclei

精确三维定位，实现EM成像——掌握精髓

低温电子断层扫描（CryoET）是一种成像技术，可以让研究人员以亚纳米分辨率观察蛋白质和其他大生物分子。了解分子的形状和结构，包括口袋和裂隙，可以帮助研究人员设计能够像拼图一样附着于分子的药物。低温ET成像也因此成为了解和治疗疾病和失调的重要基础。

如何成功进行活细胞光电关联

Coral Life 提供了简化的活细胞 CLEM 解决方案，用于深入了解细胞成分随时间发生的结构变化。除了工作流程手册中描述的技术处理外，本文还提供了成功进行实验的其他知识。

How to Successfully Implement Coral Life

The live-cell  CLEM workflow allows you to capture dynamic information related to a relevant biological process as it happens and put these observations into their ultrastructural context. The Leica…

Advancing Cellular Ultrastructure Research

Freeze-fracture and freeze-etching are useful tools for studying flexible membrane-associated structures such as tight junctions or the enteric glycocalyx. Freeze-fracture and etching are two…

[Translate to chinese:] HeLa Kyoto cells (HKF1, H2B-mCherry, alpha Tubulin, mEGFP). Left image: Maximum projection of a z-stack prior to ICC and LVCC. Right image: Maximum projection of a mosaic z-stack after ICC and LVCC.

如何使用Coral Life（活细胞光电联用）改进活细胞成像

对于活细胞 CLEM 应用而言，光学显微镜成像是在正确的时间以正确的状态识别正确细胞的关键步骤。在本文中，徕卡专家就使用宽场系统的优势以及使用蓝宝石作为细胞培养基底时需要克服的障碍分享了他们的见解。

冷冻光电联用（Cryo-CLEM）之旅

本文主要介绍Cryo-CLEM技术及其为科学家带来的便益。此外，还特别说明了一些相关文献。近期在冷冻电子显微镜工作流程领域取得的技术进步，让我们能够获取到细胞蛋白质社会学的3D数据，其分辨率更是达到前所未有的1纳米以下。工作流程中有一个步骤，需要从样品获取目标位置纳米级分辨率的图像，而要得到这样的结果，就需要用到冷冻光学显微镜。这种显微镜如果用于低温电子显微镜工作流程，通常就称为Cryo…

[Translate to chinese:] The EM ICE Nano loading area

如何让样品保持在生理状态

Coral Life工作流将动态数据与最佳的样品固定方式(高压冷冻)相结合。然而，如果您的细胞因为温度下降，或缺氧气、二氧化碳或营养物质缺乏而受到损伤，那么再好的样品保存也没有意义。这些因素将影响一系列的生物过程，甚至破坏原超微结构基础，影响您的分析。

将动态活细胞数据融入超微结构

采用徕卡Nano的工作流程，可以避免过去如海底捞针似的寻找。利用光电关联显微技术，在适当的时间直接鉴别出正确的细胞，并将动态的活细胞数据融入其超微结构中。

[Translate to chinese:] 3D reconstruction of an intercellular bridge in a C. elegans embryo

下载 EM 工作流程解决方案手册

这本 26 页的工作流程手册中讨论的解决方案已被证明能够提供快速、可靠和可重复的结果。如果您对自己的工作流程有特殊要求，或对此处显示的主题有任何疑问，我们的徕卡专家将随时乐意为您提供帮助。

Exploring the Structure and Life Cycle of Viruses

The SARS-CoV-2 outbreak started in late December 2019 and has since reached a global pandemic, leading to a worldwide battle against COVID-19. The ever-evolving electron microscopy methods offer a…

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The EM ICE High Pressure Freezer was developed with a unique freezing principle and uses only a single pressurization and cooling liquid: liquified nitrogen (LN2). This design enables three major…

使用增强功能电子显微镜研究大脑切片中的突触

神经科学的一个基本问题就是突触的结构与其功能特性之间有何关系？过去几十年，电生理学揭示了突触传递机制，而电子显微镜（EM）深入探索了突触形态。用于关联突触生理学和超微结构的方法可以追溯到20世纪中叶。目标是获得突触传递的快照，即捕获电子显微照片中的动态过程。

Advancing Cell Biology with Cryo-Correlative Microscopy

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High-pressure freezing: Revealing functional mechanisms of synaptic transmission

Learn more about applying optogenetic stimulation in the EM ICE and how this technology has the potential to reveal structural and functional mechanisms of synaptic transmission. Get a detailed…

Workflows and Instrumentation for Cryo-electron Microscopy

Cryo-electron microscopy is an increasingly popular modality to study the structures of macromolecular complexes and has enabled numerous new insights in cell biology. In recent years, cryo-electron…

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CLEM的用途是什么？

如何将CLEM数据关联起来？

Cryo-CLEM是什么？

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