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什么是相差?
相差是一种光学对比度技术,用在显微镜上可以使生物样本细胞中未染色的结构显示出来。 细胞结构在明场照明下显得透明,使用相差方法后能够具有高对比度和丰富的细节。 细胞中不同结构之间的光密度不同,光与这些结构相互作用后相位就会发生变化。 这个现象就是相差方法的基础。 光密度高的细胞结构看起来就会比光密度低的结构更暗。
相差显微镜有哪些用途? 这类显微镜可以将哪些类型的样本可视化?
相差显微镜大多数时候用于观察生物标本和组织。 从固定标本到活细胞和活组织,各种各样的生物标本都可以通过相差显微镜观察。 请阅读这些文章中举的例子:https://www.leica-microsystems.com/science-lab/phase-contrast 和 https://www.leica-microsystems.com/science-lab/optical-contrast-methods
相差显微镜如何工作?
相差显微镜类似于传统的宽场显微镜,不同之处在于它使用环形光圈和四分之一波片(λ/4)相位板。 环形光圈位于光源和聚光镜之间,相位板位于物镜后面的显微镜光学器件中。 环形光穿过光圈,被聚光镜聚焦到待观察的生物标本上。
部分环形光被样本的光密结构衍射,发生约λ/4的负相位差。 发生相位差的衍射光绕过四分之一波片。 与此不同,另一部分环形光直接穿过样本,不发生偏离,到达相位板后发生λ/4正相位差。 被样本结构衍射的光与穿过相位板的光之间的总相位差约为λ/2,因此会发生相消干涉。 因此,光密度高的细胞结构看起来就会比光密度低的结构更暗。
更多信息请参考以下文章:https://www.leica-microsystems.com/science-lab/phase-contrast

MDCK细胞,明场显微镜

MDCK细胞,相差显微镜
利用相位变化成像
光学显微镜相差显微镜
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