暗场显微镜

使用显微镜时,最常用的光学对比法是明场。但是其对许多透明生物标本和透明或反射不透明材料样本并不适用,因为通过明场只能获得低对比度的图像,而从这种图像中几乎无法分辨出任何的细节。虽然使用选择性染色剂可以增强生物标本在明场显微镜下的对比度,但这些染色剂一般对活细胞有毒。暗场显微镜则属于一种在不使用染色剂的情况下,也可以获得更大的对比度观察多种生物标本结构的方法。此外,在对材料样本进行成像时,暗场显微镜还能增强图像对比度。暗场光学对比法利用生物标本结构或材料样本的不均匀特征产生的光散射或衍射。
徕卡的暗场显微镜可用于研究各种生命科学或法医学应用中的细胞或组织。暗场显微镜也有适用于材料和地球科学应用。

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什么是暗场?

暗场是一种显微镜光学对比技术,通过其可以观察到生物标本细胞中的未染色结构。在明场照明下呈透明状的细胞结构可在暗场下以更高的对比度进行详细的观察。另外与明场显微镜相比,使用暗场显微镜更易于观察到透明材料或不透明材料表面的不均匀特征。细胞结构或材料特征这样的不均区域会散射与之相互作用的光,而均匀的区域则允许光直接通过,不会出现散射。使用暗场显微镜观察时,细胞结构或材料特征看起来更亮,而均匀的细胞或材料背景则看起来更暗。

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暗场显微镜有什么用途?使用暗场显微镜您可以观察那种样本?

不论是固定的还是活的生物标本和组织,一般都用暗场显微镜来观察。同样,也可用暗场显微镜来观察各种材料和地质样本。更多示例请参阅文章: 使用体视显微镜提高发育生物学的工作效率: Zebrafish、Medaka和Xenopus” & “如何根据您的需求调整金属合金的粒度分析”

暗场显微镜如何工作?

暗场显微镜是一种复式显微镜,它主要使用光源镜和聚光镜之间的环形孔。

穿过该孔的环形光被聚光镜聚焦到待观察的生物标本或材料样本上。部分环形光会被标本结构或样本特征衍射或散射出去。散射光会进入物镜。相比之下,直接无偏差穿过标本或被样本无散射反射的部分环形光则不会被物镜收集。经标本结构或样本特征散射的光比没有光散射的标本或样本背景区域更亮。

如需了解更多信息,请参阅文章:  “金相学 - 概述”

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Frequently Asked Questions Darkfield Microscopes

A darkfield microscope is similar to a conventional brightfield microscope, except it uses an annular aperture in front of the light source. The light from darkfield illumination impinges onto the specimen or sample at a high angle of incidence, either transmits through the sample or reflects off its surface, then passes through the objective lens, and finally goes through the eyepieces or reaches the camera sensor. Darkfield illumination causes uniform areas of transparent samples or flat surfaces of opaque samples to appear dark, as the vast majority of the light at the high incident angle misses the objective. Normally there are features in transparent samples or on the surface of opaque samples which scatter light. For this reason, darkfield microscopy images show a dark background with brighter areas corresponding to these features, because the light they scatter enters into the objective.

Yes, a live biological specimen, such as cells or an organism, can be observed easily with a darkfield microscope.

Yes, a darkfield microscope can be equipped with a camera for recording images observed with the contrast method. It can also be equipped with other accessories. For more information, contact your local Leica representative.

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