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通过 FLIM-FRET 探究分子间相互作用

现代研究探讨分子如何相互作用以完成重要任务。成功的生物医学研究利用FLIM-FRET来探索这些相互作用。

SP8 FALCON FLIM 仪器设定了新的速度标准。

它使 FRET 成为高度动态细胞事件。您可在日常实验中采集和解读FRET数据。

利用生物传感器监测细微而快速的变化

生物传感器是报告代谢活动、信号传导机制、pH和微环境变化的强大工具。

SP8 FALCON 可采集荧光寿命包含的这一类信息,甚至包括膜电位动态等超快事件。该信息补充了 SP8 平台提供的功能强大的光谱成像。

利用生物传感器监测细微而快速的变化

在传统成像中自发荧光是一个问题。

SP8 FALCON 将其转化为有价值的信息。

您现在可以将自发荧光转化为代谢状态、细胞分化和癌症发展的报告工具。

此外,SP8 FALCON 支持活体组织成像对比,其中荧光标记往往不具特异性或破坏生理条件。

借助光谱以外的方法分离荧光团

荧光标记是区分细胞内结构的标准方法。光谱分离非常强大,但有时,如果发射光谱太靠近时则受到限制。

拥有 SP8 FALCON,您可以利用额外的荧光寿命维度来克服这种限制。这提供了分离多个荧光探针的可能性。

通过综合运用 SP8 平台的各种选项,您可以享受更多的自由。选项包括白光激光激发源、声光分束器和多通道光谱检测。

图像:经由寿命对比区分的细胞骨架结构。波形蛋白以 Alexa Fluor 555 免疫标记(绿色),微管蛋白以 Alexa Fluor 546 免疫标记(蓝色)。荧光团的光谱相似度很高,但利用荧光寿命信息可将其区分开。图像大小:512 x 512 像素。

SP8 FALCON成像是快速寿命对比方法

SP8 FALCON 显微镜克服了 FLIM 的速度限制,打开快速采集寿命数据的大门。

由于 FLIM 的技术限制,目前从快速过程的荧光寿命数据提取功能信息还比较困难。FLIM 采集速度至少比记录共聚焦强度慢 10 倍。

采用 SP8 FALCON 快速寿命对比成像,可以以适当的速度跟踪细胞中的动态过程。这些任务之所以能够完成,是因为采取了利用时间相关单光子计数法(TCSPC)测量时间的新方法,以及用于数据处理和分析的智能算法。

一体化多模态成像

FLIM 与其他模态结合,难度高于与 SP8 FALCON 结合。之前,研究人员仍不得不处理复杂的布线问题和繁琐的文件传输任务。拥有 SP8 FALCON,您可以将寿命信息集成到标准共聚焦工作流中。

SP8 FALCON LAS X 采集分析软件完全集成。它可以同时记录四个光谱通道的 FLIM,并连续记录多达 10 个通道。使用 SP8 FALCON,您可以对 3D 堆栈、延时序列甚至大型拼图格式文件获得寿命对比信息。

采用新推出的 LAS X NAVIGATOR,可以将您的可视场扩展至 10000 倍,从而节省宝贵的时间来识别您感兴趣的区域,以全新的方式探索您的样品。

直接采用相量定义寿命

SP8 FALCON 中使用 FLIM 相量进行分析,可提供寿命分量的二维视图。可以使用 FLIM相量跟踪微环境变化、选择多路传输信号的分量、确定 FRET 效率。

相量 FLIM 可以提高 STED 图像的分辨率。可在较低 STED 耗散功率条件下达到同样的分辨率(Lanzanò, Nature 2015)。

点击一次即可获取结果

LAS X 软件可以单击进行 FLIM,与常规光谱成像原理相同。

即使您将显微技术用作补充技术,也可以立即找到要点并开始成像。

更多专业功能可当作工作流进行访问,可出于方便目的进行自动化。

使用 SP8 FCS 研究分子动力学

荧光相关光谱(FCS)是一种显微镜学定量技术。它用于基于强度波动研究离子浓度、扩散系数、粘度、分子质量、结合常数和光物理性质。

FCS FLIM 结合,使荧光寿命相关光谱学(FLCS)实验得以开展。FLCS 用于研究光谱不可分离分子间的相互作用,消除背景贡献。

STED 减小聚焦体积。因此,即使在高浓度范围(>100 nM)共聚焦 FCS 遇到其限制时,STED FCS 也能提供分子信息。

新的 Leica FLIM/FCS 解决方案将增强其适用性 —— 速度超快、使用灵活方便。”—— 牛津大学 Christian Eggeling 教授

大多数FLIM仪器都是附属品,这是一个颠覆性创新:真正集成式系统 —— 功能非常强大!”—— 加利福尼亚大学尔湾分校 Enrico Gratton 教授

据我所知,徕卡 SP8 FALCON 是首个在核心设施中提供共聚焦和寿命成像的商业系统。”—— 洛杉矶南加州大学 Scott E. Fraser 教授

我们仔细研究了徕卡 SP8 FALCON。它与专用 TCSPC 解决方案一样准确,但具有直观的界面且速度极快。”“在我看来,这项技术将改变功能成像的游戏规则。—— 阿姆斯特丹荷兰癌症研究所 Kees Jalink 教授

TCS SP8 系列产品

SP8 FALCON Leica Microsystems SP8 平台的新成员。通过配置,该平台可以适应不同的研究方法,范围从超分辨率共聚焦显微技术到 STED 纳米显微技术。

这为用户提供了多功能性和投资保障。

基于 SP8 平台的所有仪器均是开放的,无论现在还是将来都能适用于用户的研究需求。